LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA HEMOGLOBINOPATIEMI
primární šetření haemoglobinopathy by mělo zahrnovat úplný krevní obraz, periferní krve film a hemoglobinu elektroforézou (viz Obr. 29.4). Kompletní krevní obraz umožňuje zhodnocení tvorby hemoglobinu, jak je posuzováno podle indexů červených krvinek, průměrného objemu buněk (MCV) a průměrného buněčného hemoglobinu (MCH)., Microcytosis (MCV < 76 fL) a hypochromia (MCH < 27 pg), v obličeji normální nebo zvýšen počet červených krvinek (> 5.5 × 1012/L) v železné-plná pacienta, navrhnout diagnózu thalasémií. V případě beta thalasémií major, nebo intermedia, to je spojeno s významným stupněm anémie, vzhledem k tomu, že v thalasémií vlastnost hemoglobin je obvykle normální nebo jen mírně snížené. Vyšetření krevního filmu obarveného Giemsou může být užitečné při potvrzení diagnózy., Konečná diagnóza však často spočívá na elektroforetické nebo chromatografické analýze hemoglobinu u hemolyzátů červených krvinek. Acetát celulózy elektroforézy v alkalickém prostředí (8.9–9.1) je nejpoužívanější metodou, je jednoduché, rychlé, levné a efektivní při oddělování společné hemoglobinu variant. U anemie homozygotních srpkovitých buněk převládá HbS. Je přítomno variabilní množství HbF, vyšší proporce (> 10%) jsou obecně spojeny s mírnějším klinickým průběhem. Koncentrace hemoglobinu A2 je obvykle normální.,
Rozpustnost testování na základě snížené rozpustnosti deoxy-HbS v přítomnosti redukčních činidel, například disiřičitanem sodným, má omezenou roli v diagnostice nemocí srpkovité buňky, protože to nerozlišuje homozygotní onemocnění a dopravce státy. V nouzové situaci, pozitivní rozpustnost test se užívá ve spojení s významně sníženou hemoglobinu a typické červené buněčné morfologie body silně k diagnostice nemocí srpkovité buňky. To by měla při nejbližší příležitosti potvrdit analýza hemoglobinu., Několik dalších variant, včetně HbD, HbG a Hb Lepore, elektroforetická mobilita stejná HbS na acetát celulózy, ale mohou být rozlišeny negativní srp rozpustnost test a citrátový agar gelová elektroforéza na kyselých (pH 6.0). Podobně mohou být hemoglobiny C, E a o, které spolu migrují na acetát celulózy při alkalickém pH, diferencovány elektroforézou citrátového agaru. Jak HBe, tak HB Lepore jsou spojeny s indexy thalassaemických červených krvinek, což dále napomáhá jejich odlišení od elektroforeticky podobných variant., Isoelektrická fokusace zlepšuje rozlišení některé konstrukční varianty a mohou být také použity pro novorozenecký screening eluáty z Guthrie (zaschlá krev na místě) karty, protože to snižuje rušení od methemoglobinu přítomných v těchto vzorcích.
High performance liquid chromatography (HPLC) je rychlá a citlivá metoda pro separaci a kvantifikaci haemoglobins, že v některých případech, umožňuje identifikaci variant není možné jiné techniky., Protože je do značné míry automatizované a vyžaduje minimální množství vzorku, HPLC se stala metodou volby pro rozsáhlé populace testování, jako jsou novorozenecké screeningové programy. Univerzální novorozenecký screening srpkovitá byla použita v USA a Anglii na nějakou dobu, a podobné programy jsou zaváděny do dalších Evropských, blízkovýchodních a Afrických zemí, v závislosti na výskytu podmínky a dostupné zdroje., Tyto programy mají za následek významné přínosy z hlediska snížené úmrtnosti a morbidity v důsledku lepší péče, včasné realizace profylaxe proti pneumokokové infekci a rodičovské výchovy. U β thalassemie se podíl jednotlivých hemoglobinů liší podle základního genotypu. Homozygoti β0 thalasemie je spojena s převahou HbF, absence HbA a variabilní množství HbA2 (v rozsahu 1.0–6.0%, průměr 1.7%). U jedinců s homozygotní β+ thalasemie, nebo složené heterozygotní β0/β+ thalasemie, variabilní množství HbA je přítomen., Hemoglobin F se zvyšuje a heterogenně distribuuje mezi červené krvinky.
Přesné kvantifikaci HbA2 pomocí HPLC nebo mikrokolony chromatografie je zásadní pro diagnózu beta thalasémií vlastnost, ve které je zvýšený HbA2, typicky > 3.5%., Nositeli ‚normální‘, A2′ nebo ‚tichý‘ β talasemie vzhledem k mírné β gen vady nebo co-dědictví δ genové mutace v cis nebo trans nemůže být snadno odlišit od α-talasemie konvenční screeningové metody a vyžadují vyšetřování specializované techniky, včetně in vitro globin řetězce syntéza a analýza DNA. Analýza globin řetězce syntetické poměry tím, že tritiated leucin začlenění a karboxymethylcelulózy chromatografie je definitivní způsob, jak identifikovat jednotlivce s thalasémií, ačkoli to je zřídka používán, protože jeho pracné přírody.,
α thalassaemias jsou charakterizovány electrophoretically přítomnost rychle se pohybujících variant, Hb Bart (γ4) a HbH (β4), které jsou nejvíce patrné v novorozenecké vzorky. V hydrops fetalis v důsledku homozygotní α0 talasemie, Hb Bart převládá a nachází se v menším množství v jiných α-talasemie syndromy v novorozeneckém období. Hemoglobin h může být také detekován barvením pro inkluzní orgány HbH., Diagnóza klinicky němé formy α-talasemie je často jedním z vyloučení, je vyroben na základě etnického původu, mikrocytární hypochromní červených krvinek indexy a normální nebo nízká HbA2 koncentrace v přítomnosti normální stav železa. Definitivní diagnózu lze provést analýzou DNA, která může také často rozlišovat α0 a α+ thalassemii.,
Zatímco většina hemoglobinopatiemi může být diagnostikována pomocí hemoglobinu elektroforézu, varianty způsobené substituce aminokyselin, které nemění náboj, takový jako ti nalezený v některých nestabilní haemoglobins nebo haemoglobins se změněnou kyslíku afinitu, může uniknout detekci. Další šetření, která mohou být v této souvislosti užitečná, zahrnují hodnocení nestability hemoglobinu a afinity kyslíku., Vysoká propustnost DNA analýzu učinil to proveditelný způsob, jak pro screening mutace globinu v bohatších zemích, s technikami, jako je multiplex ligation-dependent probe amplification umožňující identifikaci velkých genových mutací, které byly dříve zjistitelné pouze pomocí Southern blotting. Hemoglobinu hmotnostní spektrometrie může být také použit k identifikaci abnormální globiny měřením jejich hmotnost přesně, zejména s potenciální využití v preventivních programech, které již pomocí hmotnostní spektrometrie.,
identifikace párů s rizikem velkých hemoglobinopatiemi o prenatální nebo preconceptional screening umožňuje informován, reprodukční volbu s možností prenatální diagnostiky. Ve většině případů toho lze nyní dosáhnout v prvním trimestru detekcí mutantních globinových genů v chorionické vilózní DNA. V několika zemích, zejména na Kypru, kde dopravce sazba pro β talasemie dosahuje 12%, to vedlo k výraznému poklesu porodnosti výskyt hemoglobinu poruchy., Preimplantační genetická diagnostika je stále více používá k tomu, aby výběr nedotčena embryí, ačkoli to pokračuje být náročný a nákladný proces, který není použitelný pro většinu párů. Pokusy pokračují ve vývoji neinvazivní prenatální diagnostiky pomocí fetálních buněk a DNA v mateřské krvi, i když to v současné době není technicky proveditelné jako rutinní postup pro hemoglobinopatie.
