diagnostic en laboratoire des hémoglobinopathies
la recherche primaire d’une hémoglobinopathie doit inclure une numération formule sanguine complète, un film sanguin périphérique et une électrophorèse de l’hémoglobine (voir Fig. 29.4). La numération formule sanguine complète permet d’évaluer la formation d’hémoglobine, selon les indices de globules rouges, le volume cellulaire moyen (MCV) et le taux d’hémoglobine cellulaire moyen (MCH)., Microcytose (MCV < 76 fL) et hypochromie (MCH < 27 pg), face à un nombre de globules rouges normal ou augmenté (> 5,5 × 1012/L) chez un patient rempli de fer, suggèrent un diagnostic de thalassémie. Dans le cas de β thalassémie majeure ou intermedia, cela est associé à un degré significatif d’anémie, alors que dans le trait thalassémique, le taux d’hémoglobine est généralement normal ou seulement légèrement réduit. L’examen d’un film sanguin taché par une méthode Giemsa peut être utile pour confirmer le diagnostic., Cependant, le diagnostic définitif repose souvent sur l’analyse électrophorétique ou chromatographique de l’hémoglobine dans les hémolysats de globules rouges. L’électrophorèse à l’acétate de Cellulose à pH alcalin (8,9-9,1) est la méthode la plus largement utilisée, étant simple, rapide, peu coûteuse et efficace pour séparer les variantes courantes de l’hémoglobine. Dans l’anémie drépanocytaire homozygote, l’HbS prédomine. Une quantité variable de HbF est présente, des proportions plus élevées (> 10%) étant généralement associées à une évolution clinique plus légère. Le taux d ‘ hémoglobine A2 est généralement normal.,
Les tests de solubilité basés sur la solubilité réduite du désoxy-HbS en présence d’agents réducteurs, par exemple la dithionite de sodium, ont un rôle limité dans le diagnostic de la drépanocytose car ils ne différencient pas la maladie homozygote et les États porteurs. En situation d’urgence, un test de solubilité positif associé à une diminution significative du taux d’hémoglobine et à une morphologie typique des globules rouges indique fortement un diagnostic de drépanocytose. Ceci doit être confirmé dans les meilleurs délais par une analyse du taux d ‘ hémoglobine., Plusieurs autres variantes, dont HbD, HBG et HB Lepore, ont une mobilité électrophorétique identique à celle de HbS sur l’acétate de cellulose, mais peuvent être distinguées par le test de solubilité négatif de la faucille et l’électrophorèse sur gel de gélose au citrate à pH acide (6,0). De même, les hémoglobines C, E et O, qui co-migrent sur l’acétate de cellulose à pH alcalin, peuvent être différenciées par électrophorèse sur gélose au citrate. HbE et HB Lepore sont tous deux associés à des indices de globules rouges thalassémiques, ce qui facilite leur distinction des variants électrophorétiquement similaires., La focalisation isoélectrique améliore la résolution de certaines variantes structurelles et peut également être utilisée pour le dépistage néonatal des éluats des cartes Guthrie (tache de sang séché), car elle réduit les interférences de la méthémoglobine présente dans de tels échantillons.
la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) est une méthode rapide et sensible pour la séparation et la quantification des hémoglobines qui, dans certains cas, permet d’identifier des variantes impossibles par d’autres techniques., Comme elle est largement automatisée et nécessite des quantités infimes d’échantillons, la CLHP est devenue la méthode de choix pour les tests de population à grande échelle tels que les programmes de dépistage néonatal. Le dépistage néonatal universel de la drépanocytose est utilisé aux États-Unis et en Angleterre depuis un certain temps, et des programmes similaires sont mis en place dans d’autres pays D’Europe, du Moyen-Orient et D’Afrique, en fonction de la prévalence des maladies et des ressources disponibles., Ces programmes ont permis de réduire considérablement la mortalité et la morbidité grâce à l’amélioration des soins, à la mise en œuvre précoce de la prophylaxie contre l’infection à pneumocoque et à l’éducation des parents. Dans la β thalassémie, la proportion d’hémoglobines individuelles varie en fonction du génotype sous-jacent. La thalassémie β0 homozygote est associée à une prédominance de L’HbF, à une absence d’HbA et à des quantités variables d’HbA2 (plage de 1,0 à 6,0%, moyenne de 1,7%). Chez les personnes atteintes de thalassémie β + homozygote ou de thalassémie β0/β+ hétérozygote composée, une quantité variable d’HbA est présente., Le taux d ‘ hémoglobine F est augmenté et réparti de manière hétérogène entre les globules rouges.
une quantification précise de L’HbA2 par HPLC ou chromatographie à microcolonne est essentielle pour le diagnostic du caractère β thalassémie, dans lequel L’HbA2 est élevé, typiquement > 3,5%., Les porteurs d’une thalassémie β « normale A2 » ou « silencieuse » due à des défauts légers du gène β ou à la co-hérédité d’une mutation du gène δ dans le cis ou le trans ne peuvent pas facilement être distingués de la thalassémie α par des méthodes de dépistage classiques et nécessitent une investigation par des techniques spécialisées, y compris la synthèse L’analyse des rapports synthétiques de la chaîne globine par incorporation de leucine tritiée et chromatographie de carboxyméthylcellulose est le moyen définitif d’identifier les personnes atteintes de thalassémie, bien qu’elle soit rarement utilisée en raison de sa nature laborieuse.,
Les Thalassémies α sont caractérisées électrophorétiquement par la présence des variants à déplacement rapide, HB Bart (γ4) et HBH (β4), qui sont les plus évidents dans les échantillons néonatals. Chez hydrops fetalis, en raison d’une thalassémie α0 homozygote, le Bart HB prédomine et se retrouve en plus petites quantités dans d’autres syndromes α thalassémie au cours de la période néonatale. Le taux d ‘hémoglobine H peut également être détecté par coloration des organes d’ inclusion de l ‘ HbH., Le diagnostic des formes cliniquement silencieuses de thalassémie α est souvent celui de l’exclusion, étant fait sur la base de l’origine ethnique du sujet, des indices de globules rouges hypochromes microcytaires et d’une concentration normale ou faible D’HbA2 en présence d’un État de fer normal. Le diagnostic définitif peut être établi par l’analyse de l’ADN, qui permet également souvent de distinguer α0 et α+ thalassémie.,
bien que la majorité des hémoglobinopathies puissent être diagnostiquées par électrophorèse de l’hémoglobine, des variantes causées par des substitutions d’acides aminés qui ne modifient pas la charge, telles que celles trouvées dans certaines hémoglobines instables ou des hémoglobines ayant une affinité altérée pour l’oxygène, peuvent échapper à la détection. Dans ce contexte, d ‘autres études peuvent être utiles, notamment l’ évaluation de l ‘instabilité du taux d’ hémoglobine et de l ‘affinité avec l’ oxygène., L’analyse de L’ADN à haut débit en a fait un moyen réalisable de dépistage des mutations de la globine dans les pays riches, avec des techniques telles que l’amplification de la sonde dépendante de la ligature multiplex permettant l’identification de grandes mutations génétiques qui n’étaient auparavant détectables qu’à L’aide de Southern blot. La spectrométrie de masse de l’hémoglobine peut également être utilisée pour identifier les globines anormales en mesurant leur masse avec précision, avec une utilisation potentielle particulière dans les programmes de dépistage qui utilisent déjà la spectrométrie de masse.,
l’identification des couples à risque d’hémoglobinopathies majeures par un dépistage prénatal ou préconceptionnel permet un choix reproductif éclairé avec l’option du diagnostic prénatal. Dans la plupart des cas, cela peut maintenant être accompli au cours du premier trimestre par la détection de gènes de globine mutants dans L’ADN villeux chorionique. Dans plusieurs pays, notamment à Chypre où le taux de porteurs de β thalassémie atteint 12%, cela a entraîné une baisse marquée de l’incidence des troubles de l’hémoglobine à la naissance., Le diagnostic génétique préimplantatoire est de plus en plus utilisé pour permettre la sélection d’embryons non affectés, bien qu’il continue d’être un processus exigeant et coûteux qui ne s’applique pas à la plupart des couples. Les tentatives continuent de mettre au point un diagnostic prénatal non invasif utilisant des cellules fœtales et de l’ADN dans le sang maternel, bien que cela ne soit actuellement pas techniquement possible en tant que procédure de routine pour les hémoglobinopathies.
