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22A:ブドウ球菌の種の同定

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目的

  • ブドウ球菌属の種分化に慣れる。
  • 選択的および差動寒天を使用して異なるブドウ球菌の種を成長させ、識別
  • 血液寒天上の3つの溶血型を識別します。,ブドウ球菌は、皮膚および鼻腔の正常なヒト微生物叢としてしばしば見出されるミクロコッカス科に属するグラム+の属であり、非胞子形成球菌である。 この属には、s.aureus、s.epidermidis、S.saprophiticus、S.haemolyticus、およびS.hominisの潜在的なヒト病原体として考慮すべき五つの生物がありますが、最初の三つは最も一般的な分離株です。 黄色ブドウ球菌は、多くの場合、三つの病原体の中で最も問題であると考えられ、血漿を凝固させることができる唯一のものであることによって、他の S., aureusisにより皮膚および根本的なティッシュ、また深刻な全身の伝染の多くの表面的なpyogenic（pus形成）伝染を引き起こすことできます。 それは腸毒素（食中毒）、細胞毒素（一般的な全身の毒素）、および有毒な衝撃のsuperantigensを含む毒素の範囲を作り出すことができます。 他のコアグラーゼ陰性ブドウ球菌（s.epidermidisおよびS.saprophiticus）は病原体としてはるかに少ない頻度で見つかるが、時には心内膜炎、人工関節感染および創傷感染と関連,

    この演習では、高塩化ナトリウム（MSAおよびSM1 10は、ブドウ球菌-7.5％NaClの単離のための選択的培地である）に基づいて、この場合、選択的培地を使用す 選択的培地は、他のものを阻害することによって特定の細菌の増殖を促進する阻害物質を有する。 MSAはそれに差動媒体をまたするマンニトールの発酵を監視するための付加的な表示器を含んでいる。, 高NaClの存在下で増殖することができる細菌のうち、いくつかは好塩性（成長するために一定濃度の塩を必要とする）であり、他のものはハロドゥル性（塩を使用しないが、それに耐えることができる）である。 ブドウ球菌は好塩性ではなく、高いNaCl濃度に生息するか耐えることができるという点で、むしろハロドゥル性である。 SM1 10およびMSAの高い塩分content有量は、他の一般的な皮膚微生物を阻害する。 この練習で使用されている他の媒体は非病原性からの病原性のあるぶどう球菌を区別するため、および種の同一証明のためです。,

    耐塩性だけでなく、ブドウ球菌は常に通性嫌気性菌である。 染色すると、小さなクラスター（staphylo=クラスター）に見られます。 ブドウ球菌は、通常、ベータ溶血性または全く溶血性ではない（ガンマ溶血と呼ばれる）。 病原性ブドウ球菌は、宿主組織を損傷する可能性のある毒素、コアグラーゼ、ロイコシジン、および加水分解酵素を含む様々な病原性因子を産生することが

    血液寒天（BAP）は5％羊の血液で作られています。 それは細菌を培養するために使用される一般的な培地である：

    1. それは気難しい細菌のための大きな濃縮培地である。,
    2. 血液細胞の溶血は、同定試験として非常に有用であり得る。CNA寒天は血液寒天の一種です。 唯一の違いは、CNAがグラム細菌を阻害する抗生物質、ナラジクス酸を有することである。

      溶血は赤血球の分解である。 溶血素は、いくつかの細菌によって産生される酵素であり、細菌コロニーの周りの培地に放出される。 それは、ヘモグロビンの放出およびコロニーの周りの周囲の培地からの赤色の除去を伴う細胞の完全な破壊であり得る。, または、溶血は部分的な崩壊であり、コロニーの周りに緑色または緑色-黄色のゾーンが生じる可能性があります。,i>

    3. VPブロス
    4. 硝酸ブロス
    5. チオグリコール酸ブロス(嫌気性増殖用)

同定手順の概略図

第1回セッション⇒第2回セッション⇒第3回セッション⇒第4回セッション

cna dnaseコアグラーゼ他の必要なテストを実行して種を識別する

msa sm110onpg

カタラーゼオキシダーゼ

グラムフェノール赤乳糖

ステインブロス

手順

注

分離株のすべてのテスト結果のリストを保持してください。,

第1回セッション

  1. 各テーブルには、aNAまたはTSAプレート上で生育するブドウ球菌種が与えられます。
  2. 分離ストリーク技術を使用して、コロンビアナラジキシン酸（CNA）を接種し、セクション1にノボビオシンディスクを配置します。
  3. ノボビオシン感受性は、ブドウ球菌種のいくつかの間で重要な差別化の特徴である。 アルコールに鉗子を置き、次に炎を通してそれらをすぐに動かすことによって鉗子を殺菌して下さい。 アルコールは火でつかまえ、鉗子から蒸発させたとき、それから生殖不能です。, あなたは今、cnaプレート上に配置するホルダーからnovobiocinディスクを選択することができます—最初のストリークセクションで（細菌の合流成長があるでしょう）。
  4. 他の寒天プレートの場合—SM110プレート、マンニトール塩寒天（MSA）プレート、DNAse寒天プレート-プレートの中央下接種ラインは、成長結果に適しています。
  5. 37℃で培地をインキュベート
  6. プレート培養上でオキシダーゼおよびカタラーゼ試験を実行します。
  7. グラムは、グラム反応と同様に形状および配置を得るために分離物を染色する。
  8. 次のセッションでONPGテストを行います。, そのテストでは、一連の遺伝子、lacオペロンをオンにする必要があります。 この活性を誘導するためには、細菌をラクトースに曝さなければならない。 これはまたフェノールの赤いラクトースの肉汁の管を接種する理由である。

2nd Session

  1. マンニトール塩およびDNAseテスト（HClが必要）を解釈するために、個々のラボ演習に行きます。
  2. CNAプレートでは、ノボビオシン抗生物質に対する感受性と血液の溶血に対する2つの反応をチェックしています。,
    1. Novobiocin感度-17mmのゾーンは感度を示します
    2. 溶血反応：
      • アルファ（α）溶血–部分的な溶血と呼ばれるビリベルジンに変換されたヘモグロビンを漏らすことによって引き起こされるコロニーの周りのグリーンゾーン
      • ベータ（β）溶血–ストレプトリシン酵素による赤血球の分解によって引き起こされるコロニーの周りの完全なクリアｌｉ＞＜ｌｉ＞γ（γ）溶血-溶血素がない、ゾーンがない＜Ｕｌ＞＜Ｌｉ＞ブドウ球菌種は、ベータ溶血性またはγ（溶血性ではない）のいずれかである。, 黄色ブドウ球菌は、通常、ベータ（完全な）溶血の広いゾーンを引き起こすアルファ毒素を生成します。
  3. SM110の成長と色素を確認してください。 栄養素やビタミンはこれから充実の色素沈着の病原性ブドウ球菌、そのコロニーなayellow-オレンジのコロニー.
  4. コアグラーゼテストを実行する：このテストのためのリンクされた練習があります。 コアグラーゼ試験に陽性であるブドウ球菌の種はほんのわずかであり（下の表を参照）、黄色ブドウ球菌が最も一般的である。, コアグラーゼ酵素結合とフリーの2種類があるので、これらの酵素を同定するために使用できる2つの異なる試験がある。 チューブ法は、最も信頼性の高い2つの決定的なテストです。 のcoagulase試験運動研究室のマニュアルを明確に記述するこれら2つのバージョン
  5. ONPGテストが実行されます。 見研究室での演習のためにこの試験のための方法を実行します。 管に少しだけ液体があるので、管の上をparafilm覆い、次にそれ上の管の上を置きたいと思います。 これは脱水を減らします。,

第3回セッション

  1. ブドウ球菌の同定に使用する主な試験反応は、ブドウ球菌を2つのグループ—コアグラーゼ陰性種とコアグラーゼ陽性種に分けるコアグラーゼ試験反応である。 でのテストメディアそのまま認識するかによって異なりカテゴリ自体の滝です。 次のテストのいくつかを実行することができます。,
  • Available media:
    • arginine and ornithine
    • decarboxylase broths
    • urea broth
    • ONPG
    • sucrose, trehalose, maltose sugars
    • VP broth
    • nitrate broth
  1. If you have a coagulase positive Staph, there are only a few species available as your choice: there is a table with those species below.,
  2. あなたの生物がコアグラーゼ陰性である場合は、以下のフローチャート、Bergeyのマニュアルまたはその他の識別書を確認してください。
  3. 識別のために必要なテストを実行します。 明確な識別のためにどのような追加のテストを実行するかを決定するのはあなた次第です。

第4回セッション

  1. 最後のセッションからテストを読みます（テストの解釈については、ラボ演習を参照してください。
  2. あなたのインストラクターがそうするように指示した場合、あなたのブドウ球菌種識別のためのレポートを書きます。,
Table 1: Differentiation among Coagulase Positive Staphylococci
Tube coagulase Acid from trehalose VP test ONPG test
S. aureus + + + –
S. intermedius + + – +
S., hyicus variable + – –
S. schleiferi + – + ?

Common coagulase negative Staphylococcal species

Table 2: Differentiation of S., aureus from other common human staphylococci normal flora
S. aureus S. epidermidis S. saprophiticus
Alpha toxin (ß-hemolysis) + (most strains) – –
Growth on 7.,acace93570″>

DNase production

+ (usually) – –
Sensitivity to novobiocin sensitive sensitive resistant

* Novobiocin sensitivity = >17mm zone size

QUESTIONS

  1. Which type of hemolysis is often associated with pathogenicity?,
  2. ブドウ球菌の特徴は何ですか？msa、SM110、coagulase、catalase、oxidase、およびDNAseの主要なテストのそれぞれのための黄色ブドウ球菌のテスト反作用を与えることができますか。
  3. ベータおよびアルファ溶血で赤血球はどうなりますか？

貢献者と帰属

  • ジャッキー-レイノルズ、生物学教授（リッチランド-カレッジ）

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