laboratoriumdiagnose van hemoglobinopathieën
het primaire onderzoek naar een hemoglobinopathie dient een volledig bloedbeeld, perifere bloedfilm en hemoglobine elektroforese te omvatten (zie Fig. 29.4). De volledige bloedtelling maakt het mogelijk de vorming van hemoglobine te bepalen, zoals beoordeeld aan de hand van de rode bloedcelindices, het gemiddelde celvolume (MCV) en het gemiddelde celvolume (MCH)., Microcytose (MCV < 76 fL) en hypochromie (MCH < 27 pg), bij een normale of verhoogde rode bloedceltelling (> 5,5 × 1012/L) bij een patiënt die ijzerrijk is, suggereren een diagnose van thalassemie. In het geval van β-thalassemie major of intermedia gaat dit gepaard met een significante mate van anemie, terwijl bij thalassemie de hemoglobinewaarde gewoonlijk normaal of slechts marginaal verlaagd is. Onderzoek van een bloedfilm gekleurd door een Giemsa methode kan nuttig zijn bij het bevestigen van de diagnose., De definitieve diagnose berust echter vaak op elektroforetische of chromatografische analyse van hemoglobine in rode celhemolysaten. De elektroforese van de celluloseacetaat bij alkalische pH (8.9–9.1) is de wijdst gebruikte methode, die eenvoudig, snel, goedkoop en efficiënt zijn in het scheiden van de gemeenschappelijke hemoglobinevarianten. Bij homozygote sikkelcelanemie overheerst HbS. Een variabele hoeveelheid HbF is aanwezig, waarbij hogere percentages (> 10%) in het algemeen geassocieerd worden met een milder klinisch verloop. De hemoglobineconcentratie A2-waarde is gewoonlijk normaal.,
Oplosbaarheidstesten op basis van de verminderde oplosbaarheid van deoxy-HbS in aanwezigheid van reductiemiddelen, bijvoorbeeld natriumdithioniet, spelen een beperkte rol bij de diagnose van sikkelcelziekte, aangezien het geen onderscheid maakt tussen de homozygote ziekte en de dragertoestand. In een noodsituatie wijst een positieve oplosbaarheidstest in combinatie met een significant verlaagde hemoglobinewaarde en een typische morfologie van de rode bloedcellen sterk op een diagnose van sikkelcelziekte. Dit dient zo spoedig mogelijk door een hemoglobineanalyse te worden bevestigd., Verschillende andere varianten, waaronder HbD, HbG en HB Lepore, hebben een elektroforetische mobiliteit die identiek is aan die van HbS op celluloseacetaat, maar kunnen worden onderscheiden door de negatieve sikkeloplosbaarheidstest en citraatagargelelektroforese bij zure pH (6.0). Evenzo kunnen hemoglobinen C, E en O, die co-migreren op celluloseacetaat bij alkalische pH, worden onderscheiden door citraatagar-elektroforese. Zowel HBE als HB Lepore worden geassocieerd met thalassemische rode celindices, die verder helpt hun onderscheid van elektroforetisch gelijkaardige varianten., Iso-elektrische focussering verbetert de resolutie van sommige structurele varianten en kan ook worden gebruikt voor neonatale screening van eluaten van Guthrie (gedroogde bloedvlek) kaarten, omdat het interferentie van methemoglobine aanwezig in dergelijke monsters vermindert.
hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) is een snelle en gevoelige methode voor scheiding en kwantificering van hemoglobinen die in sommige gevallen de identificatie mogelijk maakt van varianten die met andere technieken niet mogelijk zijn., Aangezien het grotendeels geautomatiseerd is en minuscule hoeveelheden monster vereist, is HPLC de methode van keuze geworden voor grootschalige populatietests zoals neonatale screeningsprogramma ‘ s. Universele neonatale screening op sikkelcelziekte wordt al enige tijd gebruikt in de VS en Engeland, en soortgelijke programma ‘ s worden geïntroduceerd in andere Europese, Midden-Oosten-en Afrikaanse landen, afhankelijk van de prevalentie van de omstandigheden en de beschikbare middelen., Dergelijke programma ‘ s hebben geresulteerd in aanzienlijke voordelen in termen van verminderde mortaliteit en morbiditeit als gevolg van verbeterde zorg, vroegtijdige implementatie van profylaxe tegen pneumokokkeninfectie en opvoeding door ouders. Bij β-thalassemie varieert het aandeel van individuele hemoglobines met het onderliggende genotype. Homozygote β0-thalassemie wordt geassocieerd met een overwicht van HbF, afwezigheid van HbA en variabele hoeveelheden HbA2 (bereik 1,0–6,0%, gemiddeld 1,7%). Bij personen met homozygote β+ thalassemie of samengestelde heterozygote β0/β+ thalassemie is een variabele hoeveelheid HbA aanwezig., Hemoglobine F is verhoogd en heterogeen over de rode bloedcellen verdeeld.
nauwkeurige kwantificering van HbA2 door HPLC-of microcolumnchromatografie is essentieel voor de diagnose van β-thalassemie, waarbij de hba2 verhoogd is, meestal > 3,5%., Dragers van’ normale A2 ‘of’ stille ‘ β-thalassemie als gevolg van lichte β-gendefecten of mede-overerving van een δ-genmutatie in cis of trans kunnen niet gemakkelijk worden onderscheiden van α-thalassemie met conventionele screeningsmethoden en vereisen onderzoek met behulp van gespecialiseerde technieken, waaronder in vitro globineketensynthese en DNA-analyse. De analyse van de synthetische ratio ‘ s van de globineketen door tritiated leucine incorporatie en carboxymethylcellulosechromatografie is de definitieve manier om individuen met thalassemie te identificeren, hoewel het wegens zijn arbeidsintensieve aard zelden wordt gebruikt.,
De α-thalassemieën worden elektroforetisch gekarakteriseerd door de aanwezigheid van snel bewegende varianten, HB Bart ‘ s (γ4) en HbH (β4), die het duidelijkst zijn bij neonatale monsters. In hydrops foetalis, ten gevolge van homozygote α0-thalassemie, overheerst HB Bart ‘ s en wordt in kleinere hoeveelheden aangetroffen in andere α-thalassemiesyndromen in de neonatale periode. Hemoglobine H kan ook worden gedetecteerd door kleuring van HbH inclusie-lichamen., De diagnose van klinisch stille vormen van α thalassemie is er vaak een van uitsluiting, gebaseerd op de etnische afkomst van de patiënt, microcytische hypochrome rode celindices en een normale of lage hba2 concentratie in aanwezigheid van een normale ijzerstatus. De definitieve diagnose kan worden gesteld door middel van DNA-analyse, die ook vaak α0 en α+ thalassemie kan onderscheiden.,
hoewel de meerderheid van de hemoglobinopathieën kan worden gediagnosticeerd met behulp van hemoglobine-elektroforese, kunnen varianten veroorzaakt door aminozuursubstituties die de lading niet veranderen, zoals die in sommige instabiele hemoglobines of hemoglobines met veranderde zuurstofaffiniteit, aan de detectie ontsnappen. Verdere onderzoeken die in deze context nuttig kunnen zijn, omvatten de beoordeling van hemoglobine-instabiliteit en zuurstofaffiniteit., De hoge analyse van productiedna heeft dit een haalbare manier van onderzoek voor globinemutaties in rijkere landen gemaakt, met technieken zoals multiplex ligation-afhankelijke sondeversterking die identificatie van grote genmutaties toestaan die eerder slechts opspoorbaar gebruikend Zuidelijk bevlekken waren. De hemoglobine massaspectrometrie kan ook worden gebruikt om abnormale globines te identificeren door hun massa nauwkeurig te meten, met bijzonder potentieel gebruik in screeningsprogramma ‘ s die reeds massaspectrometrie gebruiken.,
de identificatie van paren met een risico op ernstige hemoglobinopathieën door middel van prenatale of preconceptionele screening maakt geïnformeerde reproductieve keuze mogelijk met de optie van prenatale diagnose. In de meeste gevallen kan dit nu worden bereikt in het eerste trimester door detectie van mutant globine genen in chorionic villous DNA. In verscheidene landen, met name Cyprus, waar het dragerpercentage Voor β-thalassemie 12% bedraagt, heeft dit geleid tot een duidelijke daling van de geboorte-incidentie van hemoglobinestoornissen., Pre-implantatie genetische diagnose wordt steeds vaker gebruikt om selectie van onaangetaste embryo ‘ s mogelijk te maken, hoewel het een veeleisend en duur proces blijft dat niet van toepassing is op de meeste paren. Pogingen om niet-invasieve prenatale diagnose te ontwikkelen met behulp van foetale cellen en DNA in het bloed van de moeder, hoewel dit momenteel technisch niet haalbaar is als een routineprocedure voor de hemoglobinopathieën.
