laboratoriediagnostik AF HAEMOGLOBINOPATHIES
Den primære undersøgelse af en haemoglobinopathy bør omfatte et komplet blodtælling, perifert blod film og hæmoglobin-elektroforese (se Fig. 29.4). Det fulde blodtal gør det muligt at vurdere dannelsen af hæmoglobin, vurderet ud fra røde blodlegemer, middelcellevolumen (MCV) og middelcellehæmoglobin (MCH)., Microcytosis (MCV < 76 fL) og hypochromia (MCH < 27 sider), i lyset af en normal eller forhøjet røde blodlegemer (> 5.5 × 1012/L) i en jern-fyldt patient, foreslå en diagnose af talassæmi. I tilfælde af major-thalassæmi major eller intermedia er dette forbundet med en signifikant grad af anæmi, hvorimod ved træk ved thalassæmi normalt er hæmoglobinniveauet normalt normalt eller kun marginalt reduceret. Undersøgelse af en blodfilm farvet ved en Giemsa-metode kan være nyttig til at bekræfte diagnosen., Den endelige diagnose hviler imidlertid ofte på elektroforetiske eller kromatografiske analyser af hæmoglobin i røde blodlegemer. Celluloseacetatelektroforese ved alkalisk pH (8,9-9,1) er den mest anvendte metode, idet den er enkel, hurtig, billig og effektiv til at adskille de almindelige hæmoglobinvarianter. Ved homo .ygot seglcelleanæmi er HbS overvejende. En variabel mængde HbF er til stede, idet højere proportioner (> 10%) generelt er forbundet med et mildere klinisk forløb. Hæmoglobin A2-koncentrationen er sædvanligvis normal.,
Opløselighed test baseret på nedsat opløselighed af deoxy-HbS i overværelse af reduktionsmidler, for eksempel natriumdithionit, har en begrænset rolle i diagnosticering af seglcelleanæmi, da det ikke differentiere homozygot sygdom og carrier stater. I en nødsituation peger en positiv opløselighedstest i forbindelse med en signifikant reduceret hæmoglobin og typisk rødcellemorfologi kraftigt mod en diagnose af seglcellesygdom. Dette bekræftes hurtigst muligt af en hæmoglobinanalyse., Flere andre varianter, herunder HbD, HbG og Hb Lepore, har en elektroforetiske mobilitet, der er identiske med Hb om cellulose acetat, men kan være kendetegnet ved den negative segl opløselighed test og citrate agar-gel-elektroforese på syre pH (6.0). Tilsvarende kan hæmoglobinerne C, E og O, som co-migrerer på celluloseacetat ved alkalisk pH, differentieres ved citratagarelektroforese. Både HbE og Hb Lepore er forbundet med thalassæmiske røde blodlegemer, hvilket yderligere hjælper deres sondring fra elektroforetisk lignende varianter., Isoelektrisk fokusering forbedrer løsningen af nogle strukturelle varianter, og kan også bruges til neonatal screening af eluater fra Guthrie (tørret blod spot) kort, da det reducerer interferens fra methaemoglobin til stede i sådanne prøver.
high performance li .uid chromatography (HPLC) er en hurtig og følsom metode til adskillelse og kvantificering af hæmoglobin, som i nogle tilfælde tillader identifikation af varianter, der ikke er mulige ved andre teknikker., Da det stort set er automatiseret og kræver små mængder prøve, HPLC er blevet den valgte metode til storskala populationstest, såsom neonatal screeningsprogrammer. Universal neonatal screening for seglcellesygdom er blevet brugt i USA og England i nogen tid, og lignende programmer introduceres i andre europæiske, mellemøstlige og afrikanske lande, afhængigt af forekomsten af betingelserne og de tilgængelige ressourcer., Sådanne programmer har resulteret i betydelige fordele med hensyn til reduceret dødelighed og sygelighed på grund af forbedret pleje, tidlig implementering af profylakse mod pneumokokinfektion og forældreuddannelse. Ved β-thalassæmi varierer andelen af individuelle hæmoglobin i forhold til den underliggende genotype. Homozygot β0 thalassæmi er forbundet med en overvægt af HbF, fravær, HbA og variabelt beløb af HbA2 (intervallet 1.0–6.0%, betyde, at 1,7 pct.). Hos personer med Homo .ygot β+ thalassæmi eller sammensat Hetero .ygot00/+ + thalassæmi er en variabel mængde HbA til stede., Hæmoglobin f øges og fordeles heterogent blandt røde blodlegemer.
Præcis kvantificering af HbA2 ved HPLC eller microcolumn kromatografi er af afgørende betydning for diagnosen af β-thalassæmi træk, hvor HbA2 er forhøjet, typisk > 3.5%., Bærere af ‘normal A2’ eller ‘tavse’ β-talassæmi på grund af mild β gen defekter eller co-arv af et δ gene mutation i cis eller trans ikke nemt kan skelnes fra α-thalassæmi med konventionelle undersøgelsesmetoder og kræver undersøgelse af specialiserede teknikker, herunder in vitro-globin kæde syntese og DNA-analyse. Analyse af syntetiske globinkædede forhold ved tritieret leucin-inkorporering og Carbo .ymethylcellulosekromatografi er den endelige måde at identificere personer med thalassæmi på, selvom det sjældent anvendes på grund af dets besværlige karakter.,
α-thalassaemierne karakteriseres elektroforetisk ved tilstedeværelsen af de hurtigt bevægende varianter, Hb Bart ‘ s (γ4) og HbH (44), som er mest indlysende i neonatale prøver. I hydrops fetalis på grund af homozygot α0 talassæmi, Hb Bart ‘ s dominerende og findes i mindre mængder i andre α-thalassæmi-syndromer i den neonatale periode. Hæmoglobin H kan også påvises ved farvning af HbH-inklusionslegemer., Diagnosen klinisk tavse former af α-thalassæmi er ofte en af udstødelse, der er foretaget på grundlag af personens etniske oprindelse, microcytic hypochromic red cell-indeksene og en normal eller lav HbA2-koncentrationen i tilstedeværelsen af normale strygejern status. Endelig diagnose kan stilles ved DNA-analyse, som også ofte kan skelne mellem00 og α+ thalassæmi.,selvom størstedelen af hæmoglobinopatierne kan diagnosticeres ved hjælp af hæmoglobinelektroforese, kan varianter forårsaget af aminosyresubstitutioner, der ikke ændrer ladning, såsom dem, der findes i nogle ustabile hæmoglobin eller hæmoglobin med ændret o .ygenaffinitet, undslippe detektion. Yderligere undersøgelser, som kan være nyttige i denne sammenhæng, omfatter vurdering af hæmoglobinstabilitet og iltaffinitet., High throughput DNA-analyse har gjort dette til en mulig metode til screening for globin mutationer i rigere lande, med teknikker som multiplex-ligation, der er afhængige probe amplification, som muliggør identifikation af store genmutationer, der tidligere var kun påvises ved hjælp af Southern blotting. Hæmoglobinmassespektrometri kan også bruges til at identificere unormale globiner ved at måle deres masse nøjagtigt, med særlig potentiel anvendelse i screeningsprogrammer, der allerede bruger massespektrometri.,identifikation af par med risiko for større hæmoglobinopatier ved antenatal eller prækonceptionel screening tillader informeret reproduktivt valg med mulighed for prænatal diagnose. I de fleste tilfælde kan dette nu opnås i første trimester ved påvisning af mutante globingener i chorionisk villøst DNA. I flere lande, især Cypern, hvor bæreraten for β-thalassæmi når op på 12%, har dette ført til et markant fald i fødselshyppigheden af hæmoglobinforstyrrelser., Præimplantationsgenetisk diagnose bruges i stigende grad til at tillade udvælgelse af upåvirkede embryoner, selvom det fortsat er en krævende og dyr proces, der ikke gælder for de fleste par. Forsøg fortsætter med at udvikle ikke-invasiv prenatal diagnose ved hjælp af føtalceller og DNA i moderblod, selvom dette i øjeblikket ikke er teknisk muligt som en rutinemæssig procedure for hæmoglobinopatierne.
