Mål
- Blive fortrolig med den sammensætning af slægten Staphylococcus.
- Dyrk og identificer forskellige stafylokokker arter ved hjælp af selektiv og differentieret agar
- Identificer de 3 hæmolytiske typer på blodagar.,
Staphylococcus er en slægt af Gram +, nonspore-danner kokker, der tilhører familien Micrococcaceae, der ofte ses som normale menneskelige microbiota af huden og næsehulen. Der er fem organismer at betragte som potentielle menneskelige patogener i denne slægt: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus, S. haemolyticus, og S. hominis, men de tre første er den mest almindelige effekt. S. aureus betragtes ofte som den mest problematiske af de tre patogener og adskilles fra de to andre ved at være den eneste, der er i stand til at koagulere plasma. S., aureuser i stand til at forårsage mange overfladiske pyogene (pusdannende) infektioner i dermis og underliggende væv samt alvorlige systemiske infektioner. Det kan producere en række toksiner, herunder enterotoksiner (madforgiftning), cytotoksiner (generelle systemiske toksiner) og giftige chok superantigener. De andre koagulase-negative stafylokokker (S. epidermidis og S. saprophiticus) findes meget sjældnere som patogener, men er lejlighedsvis forbundet med endokarditis,protetiske ledinfektioner og sårinfektioner, bare for at nævne nogle få.,
Denne øvelse giver dig mulighed for at anvende selektive medier, i dette tilfælde baseret på høj natriumchlorid (MSA og SM1 10 er både selektive medier til isolering af Stafylokokker – 7.5% NaCl). Et selektivt medium har et hæmmende middel, der favoriserer væksten af visse bakterier ved at hæmme andre. MSA indeholder en yderligere indikator for overvågning mannitol fermentering, hvilket gør det en differentieret medier også., Af de bakterier, der kan vokse i nærvær af høj NaCl, er nogle halofile (kræver en vis koncentration af salt for at vokse), mens andre er haloduriske (brug ikke saltet, men kan tolerere det). Staphylococcuser ikke halofil, men snarere halodurisk, idet den kan leve i eller udholde høje NaCl-koncentrationer. Det høje saltindhold i SM1 10 og MSA hæmmer andre almindelige hudmikroorganismer. De andre medier, der bruges i denne øvelse, er til differentiering af patogen stafylokokker fra ikke-patogen, og til identifikation af arten.,
ikke kun saltresistent, Staphylococcus er altid facultativt anaerob. Når det farves, ses det i små klynger (staphylo = klynge). Staphylococcus er normalt enten beta-hæmolytisk eller slet ikke hæmolytisk (kaldet gamma-hæmolyse). Patogene stafylokokker kan producere en række virulensfaktorer, herunder toksiner, koagulase, leucocidiner og hydrolytiske en .ymer, der kan skade værtsvæv.
blod agar (BAP) er lavet med 5% får blod. Det er et almindeligt medium, der bruges til at dyrke bakterier, fordi:
- det er et stort berigelsesmedium for hurtige bakterier.,
- hæmolyse af blodlegemer kan være meget nyttig som en identifikationstest.
CNA agar er en type blodagar. Den eneste forskel er, at CNA har et antibiotikum, naladi .insyre, der hæmmer gram – bakterier.
hæmolyse er nedbrydning af røde blodlegemer. Hemolysiner er en .ymer produceret af nogle bakterier og frigives i mediet omkring bakteriekolonien. Det kan være en fuldstændig nedbrydning af cellerne, med frigivelse af hæmoglobin og en rydning af det røde fra det omgivende medium omkring kolonien., Eller hæmolysen kan være en delvis sammenbrud, hvilket resulterer i en grønlig eller grøngul zoneone omkring kolonien.,jeg>
SKEMATISK IDENTIFIKATION PROCEDURE
1st session ⇒ 2nd session ⇒ 3rd session ⇒ 4th session
CNA DNAse Coagulase Køre andre nødvendige tests at Identificere arter
MSA SM110 ONPG
Katalase Oxidase
Gram Phenol red laktose
Pletten Bouillon
PROCEDURER
Bemærk!
sørg for at holde en liste over alle test resultater for din isolater.,
1.Session
- hver tabel får en Stafylokokartype, der vokser på aNA-eller TSA-plade.
- ved hjælp af en isolationsstrimleteknik inokuleres Columbia naladi .insyre (CNA) og anbring novobiocin-disken i Afsnit 1.
- novobiocin følsomhed er en vigtig differentierende træk blandt nogle af Staphylococcusarterne. Anbring pincet i alkoholen, og steriliser derefter tangen ved hurtigt at køre dem gennem flammen. Alkoholen vil komme i brand, og når de fordampes fra tangen, vil de derefter være sterile., Du kan nu vælge en novobiocin-skive fra holderen for at placere på CNA-pladen – i det første streak-afsnit (hvor der vil være sammenflydende vækst af bakterien).
- for de andre agarplader–sm 110 plade, mannitol salt agar (MSA) plade, DNase agar plade—en inokuleringslinje ned i midten af pladen er tilstrækkelig til vækstresultater.
- inkubere medier ved 37 C. C.
- Kør o .idase-og katalase-test på pladekultur.
- Gram pletter isolatet for at få form og arrangement samt gram reaktion.
- Vi udfører ONPG-testen den næste session., Denne test kræver tænding af et sæt gener, lac operon. For at inducere denne aktivitet skal bakterien udsættes for lactose. Dette er grunden til, at du også inokulerer et rør med phenolrød lactose bouillon.
2. Session
- gå til individuelle laboratorieøvelser for at fortolke mannitolsalt og DNAse-testen (kræver HCl).
- på CNA-pladen kontrollerer du for 2 reaktioner – – – følsomhed over for novobiocin-antibiotikum og hæmolyse af blod.,
- Novobiocin følsomhed – En zone af 17 mm angiver følsomheden
- Hæmolytiske reaktioner :
- alpha (α) hæmolyse–grønne zone omkring kolonien, forårsaget af utætte hæmoglobin konverteret til biliverdin, der kaldes en delvis hæmolyse
- beta (β) hæmolyse–komplet udredning omkring kolonien, der er forårsaget af nedbrydningen af røde blodlegemer ved at streptolysin enzymer
- gamma (γ) hæmolyse – ingen hemolysins, ingen zone
- Staphylococcus-arter er enten beta-hæmolytisk eller gamma (ikke hæmolytisk)., Staph aureus producerer alfa-toksin, som typisk forårsager brede betaoner af beta (komplet) hæmolyse.
- kontroller SM 110 for vækst og for pigment. Næringsstoffer og vitaminer i dette medium forbedrer pigmenteringen af den patogene stafylokokker, de kolonier bliver Aygul-orange koloni.
- Kør coagulase-testen: Der er en knyttet øvelse til denne test. Der er kun få arter af stafylokokker, der er positive til koagulase-testen (se tabel nedenfor), og S. aureus er den mest almindelige., Da der er 2 slags koagulase en .ymbundet og fri—der er 2 forskellige tests, der kan bruges til at identificere disse en .ymer. RØRMETODEN er den endelige test af 2, den mest pålidelige. Coagulase test øvelsen i lab manualen beskriver klart disse 2 versioner.
- ONPG testen vil blive kørt. Se i dine laboratorieøvelser til denne test for vejledningen til, hvordan du kører testen. Da der er meget lidt væske i røret, vil du dække toppen af røret vil parafilm og derefter placere røret toppen over det. Dette reducerer dehydrering.,
3 Session
- Den store test reaktion til brug i Staphylococcus identifikation er coagulase test reaktion, der deler slægten Staphylococcus i 2 grupper—coagulase negative arter og coagulase positive arter. Testmediet, som du vil køre til identifikation, afhænger af hvilken kategori din organisme falder i. Du ønsker måske at køre nogle af følgende tests.,
- Available media:
- arginine and ornithine
- decarboxylase broths
- urea broth
- ONPG
- sucrose, trehalose, maltose sugars
- VP broth
- nitrate broth
- If you have a coagulase positive Staph, there are only a few species available as your choice: there is a table with those species below.,
- hvis dine organismer er koagulase-negative, skal du kontrollere rutediagrammet nedenfor samt Bergeys Manual eller andre identifikationsbøger.
- Kør nødvendige tests til identifikation. DET ER OP TIL DIG AT BESTEMME, HVILKE EKSTRA TESTS DER SKAL KØRES FOR EN KLAR IDENTIFIKATION.
4.Session
- Læs alle test fra sidste session (se laboratorieøvelser for information om testtolkninger.
- Skriv en rapport til din identifikation af Staphylococcus-arter, hvis din instruktør instruerer dig til at gøre det.,
| Tube coagulase | Acid from trehalose | VP test | ONPG test | |
| S. aureus | + | + | + | – |
| S. intermedius | + | + | – | + |
| S., hyicus | variable | + | – | – |
| S. schleiferi | + | – | + | ? |
Common coagulase negative Staphylococcal species
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophiticus | |
| Alpha toxin (ß-hemolysis) | + (most strains) | – | – |
| Growth on 7.,acace93570″>DNase production | + (usually) | – | – |
| Sensitivity to novobiocin | sensitive | sensitive | resistant |
* Novobiocin sensitivity = >17mm zone size
QUESTIONS
- Which type of hemolysis is often associated with pathogenicity?,
- hvad er kendetegnene for slægten Staphylococcus?
- Kan du give den test reaktion af S. aureus for hver af de store tests run—MSA, SM110, coagulase, katalase, oxidase, og DNAse?
- Hvad sker der med RBC ‘ er ved beta – og alfa-hæmolyse?
Bidragydere og Kategorier
-
Jackie Reynolds, Professor i Biologi (Richland College)
