Objectives
- vertrouwd raken met de speciatie van het geslacht Staphylococcus.
- verschillende stafylokokkensoorten kweken en identificeren met behulp van selectieve en differentiële agar
- Identificeer de 3 hemolytische typen op bloedagar.,
Staphylococcus is een geslacht van Gram +, niet-sporenvormende cocci behorende tot de familie Micrococcaceae die vaak voorkomen als normale menselijke microbiota van de huid en de neusholte. Er zijn vijf organismen te beschouwen als potentiële menselijke pathogenen in dit geslacht: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus, S. haemolyticus en S. hominis, maar de eerste drie zijn de meest voorkomende isolaten. S. aureus wordt vaak beschouwd als de meest problematische van de drie pathogenen en onderscheidt zich van de andere twee door de enige te zijn die plasma kan coaguleren. S., aureusis in staat om vele oppervlakkige pyogene (pus-vormende) infecties van de dermis en onderliggende weefsels evenals ernstige systemische infecties veroorzaken. Het kan een waaier van toxines met inbegrip van enterotoxins (voedselvergiftiging), cytotoxins (algemene systemische toxines), en toxische shock superantigens produceren. De andere coagulase-negatieve stafylokokken (S. epidermidis en S. saprophiticus) worden veel minder vaak gevonden Als pathogenen, maar worden soms geassocieerd met endocarditis,prothese gewrichtsinfecties en wondinfecties, om er maar een paar te noemen.,
deze oefening geeft u de mogelijkheid om selectieve media te gebruiken, in dit geval gebaseerd op een hoog natriumchloride – gehalte (MSA en SM1 10 zijn beide selectieve media voor de isolatie van stafylokokken-7,5% NaCl). Een selectief medium heeft een remmend middel dat de groei van bepaalde bacteriën bevordert door anderen te remmen. MSA bevat een extra indicator voor het controleren van mannitol fermentatie, waardoor het ook een differentiële media., Van de bacteriën die kunnen groeien in de aanwezigheid van hoge NaCl, sommige zijn halofiel (die een bepaalde concentratie van zout om te groeien) terwijl andere zijn haloduric (gebruik het zout niet, maar kan verdragen). Staphylococcus is niet halofiel, maar eerder halodurisch, in die zin dat het in hoge NaCl concentraties kan leven of verdragen. Het hoge zoutgehalte in SM1 10 en MSA remt andere veel voorkomende huidmicro-organismen. De andere media die in deze oefening worden gebruikt zijn voor het onderscheiden van pathogene Staphylococcus van nietpathogene, en voor de identificatie van de soort.,
niet alleen zout resistent, Staphylococcus is altijd facultatief anaëroob. Wanneer gekleurd, zal het worden gezien in kleine clusters (staphylo = cluster). Staphylococcus is meestal ofwel beta hemolytische of helemaal niet hemolytische (genaamd gamma hemolyse). De pathogene stafylokokken kunnen een verscheidenheid van virulentiefactoren, met inbegrip van toxine,coagulase, leucocidins, en hydrolytische enzymen produceren die gastheerweefsels kunnen beschadigen.
bloedagar (Bap) wordt gemaakt met 5% schapenbloed. Het is een veel gebruikt medium om bacteriën te kweken omdat:
- Het is een groot verrijkingsmedium voor veeleisende bacteriën.,
- hemolyse van bloedcellen kan zeer nuttig zijn als identificatietest.
CNA-agar is een type bloedagar. Het enige verschil is dat CNA een antibioticum heeft, naladixinezuur, dat gram – bacteriën remt.
hemolyse is de afbraak van rode bloedcellen. Hemolysines zijn enzymen geproduceerd door sommige bacteriën en worden vrijgegeven in het medium rond de bacteriële kolonie. Het kan een volledige afbraak van de cellen, met de afgifte van hemoglobine en een clearing van het rood uit het omringende medium rond de kolonie., Of de hemolyse kan een gedeeltelijke afbraak zijn, resulterend in een groenachtige of groengele zone rond de kolonie.,ik>
SCHEMATISCHE weergave van de IDENTIFICATIE VAN de PROCEDURE
1e sessie lesweken ⇒ 2e sessie lesweken ⇒ 3e sessie lesweken ⇒ 4e session
CNA DNAse Coagulase het Uitvoeren van andere tests nodig Identificeren van soorten
MSA SM110 ONPG
Katalase-Oxidase
Gram Fenol rood lactose
Vlek Bouillon
DE PROCEDURES
Opmerking
zorg ervoor dat een lijst van alle test-resultaten voor uw isolaten.,
1e sessie
- elke tabel krijgt een Stafylokokkensoort die groeit op aNA-of TSA-plaat.ent het Columbia naladixinezuur (CNA) in met behulp van een isolatiestreaktechniek en plaats het novobiocinisch schijfje in Rubriek 1.
- gevoeligheid voor Novobiocin is een belangrijk onderscheidend kenmerk van sommige Staphylococcus-soorten. Plaats de tang in de alcohol en steriliseer de tang door ze snel door de vlam te laten lopen. De alcohol zal in brand vliegen en wanneer verdampt uit de tang, zullen ze dan steriel zijn., U kunt nu een novobiocin—schijf uit de houder kiezen om op de CNA-plaat te plaatsen-in de eerste streak-sectie (waar er samenvloeiende groei van de bacterie zal zijn).
- voor de andere agarplaten — SM 110 plaat, mannitol zout agar (MSA) plaat—DNAse agar plaat-een inoculatie lijn langs het midden van de plaat is voldoende voor de groei resultaten.incubeer media bij 37°C.
- voer oxidase-en catalase-tests uit op plaatcultuur.
- Gramkleur het isolaat om vorm en opstelling te krijgen, evenals gramreactie.
- we zullen de ONPG-test de volgende sessie doen., Die test vereist het aanzetten van een set genen, het lac operon. Om deze activiteit op te wekken, moet de bacterie worden blootgesteld aan lactose. Daarom zal u ook een tube fenolrood lactose bouillon inenten.
2e sessie
- ga naar individuele laboratoriumoefeningen om de mannitolzout-en DNAse-test te interpreteren (HCl is vereist).
- op de CNA-plaat controleert u 2 reacties – – – gevoeligheid voor het novobiocin-antibioticum en hemolyse van bloed.,
- Novobiocin gevoeligheid – Een zone van 17 mm geeft de gevoeligheid
- Hemolytische reacties :
- alpha (α) hemolyse–groene zone rond de kolonie, veroorzaakt door lekkende hemoglobine omgezet naar biliverdin, wel een gedeeltelijke hemolyse
- beta (β) hemolyse–compleet vastgelopen rond de kolonie veroorzaakt door afbraak van rode bloedcellen door streptolysin enzymen
- gamma (γ) hemolyse – geen hemolysins, geen zone
- Staphylococcus-soorten zijn ofwel beta-hemolytische of gamma (niet hemolytisch)., Stafylokok aureus produceert alfatoxine die typisch brede zones van beta (volledige) hemolyse veroorzaakt.
- controleer de SM 110 op groei en op pigment. Voedingsstoffen en vitaminen in dit medium verbeteren de pigmentatie van de pathogene Staphylococcus, die kolonies steeds een geel-oranje kolonie.
- Voer de coagulasetest uit: Er is een samenhangende oefening voor deze test. Er zijn slechts een paar soorten Staphylococcus die positief zijn voor de coagulasetest (zie onderstaande tabel), en S. aureus is de meest voorkomende., Aangezien er 2 soorten coagulase enzymgebonden en vrij zijn – – – zijn er 2 verschillende tests die kunnen worden gebruikt om deze enzymen te identificeren. De BUISMETHODE is de definitieve test van de 2, de meest betrouwbare. De coagulase test oefening in de lab handleiding beschrijft deze 2 versies duidelijk.
- de ONPG-test wordt uitgevoerd. Kijk in uw lab oefeningen voor deze test voor de aanwijzingen over hoe de test uit te voeren. Aangezien er zeer weinig vloeistof in de buis, wilt u de bovenkant van de buis te dekken zal parafilm en plaats de tube top over dat. Dit vermindert uitdroging.,
3e sessie
- de belangrijkste testreactie voor de identificatie van Staphylococcus is de coagulasetestreactie, die het geslacht Staphylococcus verdeelt in 2 groepen—coagulasenegatieve soorten en coagulasepositieve soorten. De testmedia die u gebruikt voor identificatie hangt af van de categorie waarin uw organisme valt. U kunt een aantal van de volgende tests uitvoeren.,
- Available media:
- arginine and ornithine
- decarboxylase broths
- urea broth
- ONPG
- sucrose, trehalose, maltose sugars
- VP broth
- nitrate broth
- If you have a coagulase positive Staph, there are only a few species available as your choice: there is a table with those species below.,
- als uw organismen negatief zijn voor coagulase, controleer dan het stroomschema hieronder, evenals het Handboek van Bergey of andere identificatieboeken.
- Voer de nodige tests uit voor de identificatie. HET IS AAN U OM TE BEPALEN WELKE EXTRA TESTS MOETEN WORDEN UITGEVOERD VOOR EEN DUIDELIJKE IDENTIFICATIE.
4e sessie
- alle tests van de laatste sessie lezen (zie laboratoriumoefeningen voor informatie over testinterpretaties.
- Schrijf een rapport op voor de identificatie van uw Staphylococcus-soorten, als uw instructeur u daartoe opdracht geeft.,
| Tube coagulase | Acid from trehalose | VP test | ONPG test | |
| S. aureus | + | + | + | – |
| S. intermedius | + | + | – | + |
| S., hyicus | variable | + | – | – |
| S. schleiferi | + | – | + | ? |
Common coagulase negative Staphylococcal species
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophiticus | |
| Alpha toxin (ß-hemolysis) | + (most strains) | – | – |
| Growth on 7.,acace93570″>DNase production | + (usually) | – | – |
| Sensitivity to novobiocin | sensitive | sensitive | resistant |
* Novobiocin sensitivity = >17mm zone size
QUESTIONS
- Which type of hemolysis is often associated with pathogenicity?,
- Wat zijn de onderscheidende kenmerken van het geslacht Staphylococcus?
- kunt u de testreactie van S. aureus voor elk van de belangrijkste tests uitvoeren—MSA, SM110, coagulase, catalase, oxidase en DNAse?
- Wat gebeurt er met RBC ‘ s in bèta-en alfa-hemolyse?
bijdragers en toeschrijvingen
-
Jackie Reynolds, hoogleraar biologie (Richland College)
