Tavoitteet
- perehtyy lajiutuminen suvun Staphylococcus.
- Kasvaa ja tunnistaa eri lajien stafylokokkien käyttämällä valikoivia ja ero agar
- Tunnistaa 3 hemolyyttinen tyypit verimaljalla.,
Staphylococcus on suvun Gram +, nonspore muodostava kokkeja, jotka kuuluvat perheeseen Micrococcaceae, jotka ovat usein löydetty ihmisen normaaliin bakteerikantaan iholla ja nenän pesillä. On olemassa viisi organismien harkita mahdollisia ihmisen taudinaiheuttajien tämän suvun: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus, S. haemolyticus ja S. hominis, mutta kolme ensimmäistä ovat yleisimmät eristää. S. aureus on usein pidetään kaikkein ongelmallista kolme taudinaiheuttajia ja on erotettavissa kaksi muuta olemalla vain yksi voi hyytyä plasmassa. S., aureus pystyy aiheuttamaan monia pinnallisia pyogeenisiä (mätä muodostava) infektioita dermis ja taustalla kudosten sekä vakavia systeemisiä infektioita. Se voi tuottaa erilaisia myrkkyjä kuten enterotoxins (ruokamyrkytys), sytotoksiinit (yleisiä systeemisiä myrkkyjä) ja toksinen shokki superantigens. Muut koagulaasi-negatiivisten stafylokokkien (S. epidermidis ja S. saprophiticus) ovat paljon vähemmän usein kuin taudinaiheuttajia, mutta ovat joskus liittyy sydämen sisäkalvon tulehdus, proteesin yhteinen infektioita ja haavan infektioita, vain muutamia mainitakseni.,
Tämä harjoitus antaa sinulle mahdollisuuden käyttää valikoivaa median, tässä tapauksessa, joka perustuu korkean natriumkloridi (MSA ja SM1 10 ovat molemmat valikoiva median eristäminen Stafylokokki – 7.5% NaCl). Selektiivisellä väliaineella on inhiboiva aine, joka suosii tiettyjen bakteerien kasvua estämällä toisia. MSA sisältää ylimääräisen indikaattorin mannitolikäymisen seurantaan, mikä tekee siitä myös differentiaaliaineen., Bakteereja, jotka voivat kasvaa, kun läsnä on korkea NaCl, jotkut ovat halophilic (vaatii tietty suolapitoisuus kasvaa) kun taas muut ovat haloduric (älä käytä suolaa, mutta voi sietää sitä). Staphylococcus ei ole halofiilinen, vaan pikemminkin haloduurinen, koska se voi elää tai kestää korkeita NaCl-pitoisuuksia. SM1 10: n ja MSA: n korkea suolapitoisuus estää muita yleisiä ihon mikro-organismeja. Muut media käytetään tässä harjoituksessa on erottaa patogeeninen Staphylococcus alkaen patogeeninen, ja lajin tunnistus.,
paitsi suolankestävä, Staphylococcus on aina facultatiivisesti anaerobinen. Värjättynä se näkyy pieninä ryppäinä (stafylo = klusteri). Staphylococcus on yleensä joko beeta-hemolyyttinen tai ei-hemolyyttinen ollenkaan (kutsutaan gamma-hemolyysi). Patogeenisten Stafylokokit voivat tuottaa erilaisia virulenssi tekijät, kuten myrkkyjä,koagulaasi, leucocidins, ja hydrolyyttinen entsyymit, jotka voivat vahingoittaa isäntä kudosten.
veriagar (BAP) valmistetaan 5% lampaanverellä. Se on yhteinen keskipitkän käytetään kulttuuri-bakteerit, koska:
- Se on suuri rikastamisen väline nirso bakteerit.,
- verisolujen hemolyysi voi olla hyvin hyödyllinen tunnistuskokeena.
CNA-agar on eräänlainen verimaljalla. Ainoa ero on, että CNA on antibiootti, naladixic happoa, joka estää gram – bakteereja.
hemolyysi on punasolujen hajoamista. Hemolysiinit ovat joidenkin bakteerien tuottamia entsyymejä, jotka vapautuvat bakteeriyhdyskuntaa ympäröivään väliaineeseen. Se voi olla täydellinen erittely solut, vapauttaa hemoglobiini ja clearing punainen ympäröivästä väliaineesta ympäri siirtomaa., Tai hemolyysi voi olla osittainen hajoaminen, jolloin yhdyskunnan ympärille muodostuu vihertävä tai vihreänkeltainen vyöhyke.,i>
KAAVAMAINEN TUNNISTAMISEN MENETTELY
1st session ⇒ 2. istunto ⇒ 3. istunto ⇒ 4. istunto
CNA DNAse Koagulaasi käyttää myös muita testejä tarvitaan Tunnistamaan lajeja,
MSA SM110 ONPG
Oksidaasi Katalaasi
Gram fenolipunainen laktoosia
Tahra Liemi
MENETTELYJEN
Huom.
muista pitää luetteloa kaikista testin tuloksia eristää.,
1. Istunto
- Kunkin taulukon annetaan Stafylokokki laji kasvaa aNA-tai TSA-levy.
- Käyttämällä erikseen putki tekniikka, rokottaa Columbia naladixic happo (CNA) ja aseta novobiocin levy 1 jakso.
- Novobiocin herkkyys on keskeinen erityispiirteitä joukossa joitakin Staphylococcus-lajit. Aseta pihdit alkoholiin ja steriloi sitten pihdit juoksuttamalla ne liekin läpi nopeasti. Alkoholi syttyy palamaan ja kun se haihtuu pihdeistä, ne ovat sitten steriilejä., Voit nyt valita novobiocin levyn pidikkeestä paikka CNA levy—ENSIMMÄINEN putki-osiossa (jossa tulee olla pulloa kasvun bakteeria).
- muiden agar levyt-SM 110 levy,mannitoli suolaa agar (MSA) levy, DNAse-agarmaljalla—rokotus viiva alas keskellä levy on riittävä kasvu-tuloksia.
- Inkuboidaan media 37°C.
- Suorita oksidaasi-ja katalaasi-testit levy kulttuuria.
- Gram tahraa isolaatin saadakseen muodon ja asetelman sekä gram-reaktion.
- teemme ONPG-testin seuraavassa istunnossa., Testi vaatii geenien, lac operonin, käynnistämistä. Tämän toiminnan indusoimiseksi bakteerin on altistuttava laktoosille. Tämän vuoksi rokotat myös putkessa fenolipunaista laktoosiliemeä.
2. Istunto
- Mene yksittäisten lab harjoituksia tulkita mannitoli suolaa ja DNAse-testi (vaatii HCl).
- On CNA-levy, olet tarkkailun 2 reaktiot—herkkyys novobiocin antibiootti JA hemolyysi veren.,
- Novobiocin herkkyys – alue 17 mm osoittaa, herkkyys
- Hemolyyttinen reaktiot :
- alfa (α) hemolyysi–vihreä vyöhyke noin siirtomaa, aiheuttama vuotaa hemoglobiini muunnetaan biliverdiini, kutsutaan osittainen hemolyysi
- beta (β) hemolyysi–täydellinen selvitys-noin siirtomaa aiheuttama jakautuminen RBCs, jonka streptolysin entsyymejä
- gamma (γ) hemolyysi – ei hemolysins, ei vyöhykkeellä
- Staphylococcus-lajit ovat joko beeta-hemolyyttinen tai gamma (ei hemolyyttinen)., Staph aureus tuottaa alfatoksiinia, joka aiheuttaa tyypillisesti laajoja beeta – (täydellisen) hemolyysin vyöhykkeitä.
- Tarkista SM 110 kasvun ja pigmentti. Ravintoaineet ja vitamiinit tässä väliaineessa parantavat patogeenisen Staphylococcus-bakteerin pigmenttiä, nämä pesäkkeet muuttuvat ayellow-oranssiksi yhdyskunnaksi.
- Juokse koagulaasitesti: tähän testiin on linkitetty harjoitus. On vain muutamia Stafylokokkilajeja, jotka ovat positiivisia koagulaasitestissä (katso alla oleva taulukko), ja S. aureus on yleisin., Koska on olemassa 2 erilaista koagulaasientsyymiin sitoutunutta ja vapaata – – on 2 erilaista testiä, joita voidaan käyttää näiden entsyymien tunnistamiseen. PUTKIMENETELMÄ on 2: n lopullinen testi, luotettavin. Koagulaasi testi harjoitus lab käsikirja kuvaa selvästi nämä 2 versiot.
- ONPG-testi ajetaan. Katso tämän testin laboratorioharjoituksistasi ohjeet testin suorittamiseen. Koska putkessa on hyvin vähän nestettä, haluat peittää putken yläreunan parafilmin ja aseta putken yläosa sen päälle. Tämä vähentää nestehukkaa.,
3. Istunto
- suuret testata reaktio käyttää Staphylococcus tunnistaminen on koagulaasi-testi reaktio, joka jakaa suvun Staphylococcus 2 ryhmään—koagulaasi-negatiiviset lajit ja koagulaasipositiivisten lajeja. Testi media, joka kestää tunnistaminen riippuu siitä, mihin luokkaan organismi kuuluu. Saatat haluta tehdä joitakin seuraavista testeistä.,
- Available media:
- arginine and ornithine
- decarboxylase broths
- urea broth
- ONPG
- sucrose, trehalose, maltose sugars
- VP broth
- nitrate broth
- If you have a coagulase positive Staph, there are only a few species available as your choice: there is a table with those species below.,
- Jos eliöillä on koagulaasi-negatiivinen, tarkistaa vuokaavio alla, sekä Bergey ’ s Manual tai muu tunniste kirjoja.
- tee tunnistamista varten tarvittavat testit. SINUN ON PÄÄTETTÄVÄ, MITÄ LISÄTESTEJÄ TEHDÄÄN SELVÄN TUNNISTUKSEN SAAMISEKSI.
4. Istunto
- Lue kaikki testit viime istunnossa (ks lab harjoituksia tietoa testi tulkintoja.
- Kirjoita Staphylococcus-lajien tunnistusraportti, jos ohjaajasi käskee sinua tekemään niin.,
| Tube coagulase | Acid from trehalose | VP test | ONPG test | |
| S. aureus | + | + | + | – |
| S. intermedius | + | + | – | + |
| S., hyicus | variable | + | – | – |
| S. schleiferi | + | – | + | ? |
Common coagulase negative Staphylococcal species
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophiticus | |
| Alpha toxin (ß-hemolysis) | + (most strains) | – | – |
| Growth on 7.,acace93570″>DNase production | + (usually) | – | – |
| Sensitivity to novobiocin | sensitive | sensitive | resistant |
* Novobiocin sensitivity = >17mm zone size
QUESTIONS
- Which type of hemolysis is often associated with pathogenicity?,
- mitkä ovat Staphylococcus-suvun tunnusmerkit?
- voit antaa testi reaktio S. aureus jokaisen suuren testit ajaa—MSA, SM110, koagulaasi -, katalaasi -, oksidaasi, ja DNAse?
- mitä tapahtuu RBCs: lle beeta-ja alfa-hemolyysissä?
Avustajat ja Attribuutiot
-
Jackie Reynolds, Professori Biologian (Richland College)
