LABORATORIO DIAGNOOSI hemoglobinopatia ja joita hoidettiin erilaisilla
ensisijainen tutkimus haemoglobinopathy pitäisi kuulua täydellinen verenkuva, perifeerisen veren elokuva-ja hemoglobiinin elektroforeesi (ks. 29.4). Täydellinen verenkuva mahdollistaa hemoglobiinin muodostumisen arvioinnin punasoluindeksien, keskimääräisen solutilavuuden (MCV) ja hemoglobiinin (MCH) perusteella., Microcytosis (MCV < 76 fL) ja hypochromia (MCH < 27 pg), edessä normaali tai koholla punainen-solujen määrä (> 5.5 × 1012/L) rauta-täynnä potilas, ehdottaa diagnoosi talassemia. Jos β-talassemia major tai intermedia, tämä liittyy merkittäviä aste anemia, kun taas talassemia piirre hemoglobiini on yleensä normaali tai vain lievästi alentunut. Giemsa-menetelmällä värjätyn verikalvon tutkiminen voi auttaa diagnoosin vahvistamisessa., Lopullinen diagnoosi perustuu kuitenkin usein hemoglobiinin elektroforeettiseen tai kromatografiseen analyysiin punasolujen hemolysaateissa. Selluloosa-asetaatti elektroforeesi klo emäksinen pH (8.9–9.1) on yleisimmin käytetty menetelmä on yksinkertainen, nopea, edullinen ja tehokas erottamalla yleinen hemoglobiinin variantteja. Homotsygoottisessa sirppisoluanemiassa HbS on vallitseva. Vaihteleva määrä HbF on läsnä, korkeampi mittasuhteet (> 10%) on yleensä liittyy lievempi kliinisen kurssin. Hemoglobiinin A2-pitoisuus on yleensä normaali.,
Liukoisuuden testaus perustuu vähentää liukoisuutta deoxy-HbS läsnä pelkistävät aineet, esimerkiksi natrium-dithionite, on rajoitettu rooli diagnoosi sirppisoluanemia, koska se ei ole erottaa taudin homotsygoottinen ja kantaja toteaa. Hätätilanteessa, positiivinen liukoisuus testi tehdään yhdessä merkittävästi vähentää hemoglobiinin ja tyypillinen punasolujen morfologia pistettä voimakkaasti kohti diagnoosi sirppisoluanemia. Tämä tulee varmistaa hemoglobiinianalyysillä mahdollisimman pian., Useita muita vaihtoehtoja, mukaan lukien HbD, HbG ja Hb Lepore, on elektroforeettinen liikkuvuus identtinen HbS selluloosa, mutta voi olla ominaista negatiivinen sirppi liukoisuus testi ja sitraatti agar-geeli elektroforeesi klo hapan pH (6.0). Samoin selluloosa-asetaatilla samanaikaisesti emäksisessä pH: ssa vaeltavat hemoglobiinit C, E ja O voidaan erilaistaa sitraatti-agar-elektroforeesilla. Molemmat HbE-ja Hb Lepore liittyvät annoksella punasolujen indeksit, jotka edelleen aids heidän erotetaan electrophoretically vastaavia variantteja., Isoelektrinen fokusointi parantaa päätöslauselman joitakin rakenteellisia variantteja ja voidaan käyttää myös vastasyntyneiden seulonta eluates Guthrie (kuivunutta verta paikalla) – kortit, koska se vähentää häiriöitä methemoglobiinia läsnä tällaisia näytteitä.
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) on nopea ja herkkä menetelmä erottaminen ja määritysraja haemoglobins, että joissakin tapauksissa, mahdollistaa tunnistamisen vaihtoehdot ole mahdollista muilla menetelmillä., Koska se on suurelta osin automatisoitu ja vaatii vain pieniä määriä näytettä HPLC on tullut menetelmän valinta laajamittainen väestön testaus, kuten vastasyntyneiden seulontaohjelmat. Yleinen vastasyntyneiden seulonta sirppisoluanemia on käytetty USA: ssa ja Englannissa jo jonkin aikaa, ja samankaltaisia ohjelmia on otettu käyttöön muita Euroopan, Lähi-Idän ja Afrikan maissa, riippuen esiintyvyys olosuhteet ja käytettävissä olevat resurssit., Tällaisia ohjelmia ovat aiheuttaneet merkittäviä hyötyjä vähentää kuolleisuutta ja sairastuvuutta, koska parantunut hoito, varhainen täytäntöönpano estolääkitys pneumokokki-infektio ja vanhempien koulutus. Β-talassemiassa yksittäisten hemoglobiinien osuus vaihtelee perimmäisen genotyypin mukaan. Homotsygoottinen β0 talassemia liittyy suurin osa on HbF, koska HbA ja vaihtelevia määriä HbA2 (vaihteluväli 1.0–6.0%, keskiarvo 1.7%). Henkilöillä, joilla on homotsygoottinen β+ – talassemia tai yhdiste heterotsygoottinen β0/β+ – talassemia, vaihteleva määrä HbA on läsnä., Hemoglobiini F nousee ja jakautuu heterogeenisesti punasolujen kesken.
Tarkka määritysraja HbA2 by HPLC tai mikrokolonnista kromatografia on välttämätöntä, jotta diagnoosi β-talassemia piirre, jossa HbA2 on koholla, tyypillisesti > 3.5%., Kantajia ’normaali A2’ tai ’hiljainen’ β-talassemia johtuu lievää β-geenin vikoja tai co-perintö δ-geenin mutaatio cis-tai trans ei voi helposti erottaa α-talassemia tavanomaisilla seulonta menetelmiä ja edellyttävät tutkimuksen erikoistuneita tekniikoita, mukaan lukien in vitro-globiini ketjun proteiinisynteesiä ja DNA-analyysi. Analyysi globiini ketjun synteettinen tunnusluvut, joita tritiumilla merkittyä leusiini yhtiöittäminen ja karboksimetyyliselluloosaa kromatografia on lopullinen tapa tunnistaa yksilöitä, joilla on talassemia, vaikka se on harvoin käytetty, koska sen työlästä luonto.,
α thalassaemias on ominaista electrophoretically läsnäolo nopeasti liikkuvat vaihtoehdot, Hb Bart ’ s (γ4) ja HbH (β4), joka on ilmeisin vastasyntyneiden näytteet. Vuonna hydrops fetalis, koska homotsygoottinen α0-talassemia, Hb Bart on hallitseva ja löytyy pienempiä määriä muita α-talassemia oireyhtymät vastasyntyneisyyskaudella. Hemoglobiini H voidaan havaita myös värjäytymällä HBH: n osallisuuselimissä., Diagnoosi kliinisesti hiljainen muotoja α-talassemia on usein syrjäytymistä, joka on tehty perusteella aihe on etninen alkuperä, microcytic hypokromista punasolujen indeksit ja normaali tai alhainen HbA2 pitoisuus läsnäolo normaali rautaa tila. Lopullinen diagnoosi voidaan tehdä DNA-analyysi, joka voi myös usein erottaa α0 ja α+ talassemia.,
Vaikka suurin osa hemoglobinopatia ja joita hoidettiin erilaisilla voidaan diagnosoida hemoglobiini elektroforeesi, vaihtoehdot aiheuttama aminohapon vaihdot, jotka eivät muuta maksua, kuten niitä löytyy joitakin epävakaa haemoglobins tai haemoglobins muuttunut hapen affiniteetti, voi paeta havaitsemiseen. Muita tässä yhteydessä mahdollisesti hyödyllisiä tutkimuksia ovat hemoglobiinin epävakauden ja hapen affiniteetin arviointi., Suurikapasiteettisten DNA-analyysi on tehty tämä toteuttamiskelpoinen tapa seulonta globiinia mutaatioita rikkaiden maiden, kanssa tekniikoita, kuten multiplex ligation-dependent probe amplification, joiden avulla voidaan yksilöidä suuri geenimutaatioita, jotka olivat aiemmin vain havaittavissa käyttää Southern blotting. Hemoglobiinin massa spektrometria voidaan käyttää myös tunnistamaan epänormaalia globins mittaamalla niiden massa tarkasti, erityisesti mahdollisuuksia käyttää seulonta ohjelmia, jotka jo käyttävät massaspektrometria.,
tunnistaminen parit riski merkittävä hemoglobinopatia ja joita hoidettiin erilaisilla by synnytystä tai preconceptional seulonta mahdollistaa tiedon lisääntymiseen valinta vaihtoehto sikiödiagnostiikkaa. Useimmissa tapauksissa, tämä voidaan nyt tehdä ensimmäisen raskauskolmanneksen, jonka havaitseminen mutantti globin geenin chorionic villous DNA: ta. Useissa maissa, kuten Kyproksessa, missä harjoittaja korko β-talassemia saavuttaa 12%, tämä on johtanut selvään laskuun syntymän esiintyvyys hemoglobiini häiriöt., Preimplantaation geneettinen diagnoosi käytetään yhä enemmän, jotta valinta ei vaikuta alkioiden, vaikka se on edelleen vaativa ja kallis prosessi, joka ei sovellu useimmat parit. Yritykset edelleen kehittää non-invasiivisia sikiödiagnostiikkaa avulla sikiön soluja ja DNA: ta äidin verta, vaikka tämä ei tällä hetkellä ole teknisesti mahdollista kuin rutiininomainen menettely hemoglobinopatia ja joita hoidettiin erilaisilla.
