Good Mood

Vaikutus rbST maidon tuottoa

Taulukossa 2 on esitetty yhteenveto maitotuotos varten rbST-ja kontrolliryhmissä ilmaistuna keskiarvo ja keskihajonta maidon tuotanto (Kg / päivä) jokaisen hoitojakson, sekä tuotannon ero ryhmien välillä (% ylimääräistä maitoa, joka on tuotettu rbST ryhmän vertailu hallita eläimiä)., Syklin 0 sykli 3, maidon tuotanto näyttää kasvavan molemmissa ryhmissä, mahdollisesti osoittaa, että eläimiä ei ollut vielä saavuttanut huippunsa imetyksen. Vaikka ensimmäinen annos rbST annettiin noin 2 kuukautta synnytyksen jälkeinen, kuten valmistajan suosittelemia, se on tärkeää huomata, että tämä suositus perustuu matemaattisia malleja, jotka paikantaa maidon tuotanto huipussaan 60-90 päivää synnytyksen jälkeen., Kuitenkin, nämä mallit ovat vain teoreettisia lähestymistapoja ja päivää maitoa (DIM) maito huippu on laaja vaihtelu karjojen ja lehmien, on ehdollinen muun muassa tekijät, hyvinvointia ja feeding37. Jakson 4 loppuun tutkimuksen, väheneminen maidontuotannosta ohjaus lehmät voi olla vilaukselta, kun rbST-hoidettujen eläinten tuntui säilyttää tuotannon suhteellisen vakiona 30-35 kg keskimääräinen maitoa päivässä, osoittaa selvä laskeva suuntaus vain silloin, kun hormonaalinen hoito lopetettiin (syklit 14, 15 ja 16)., Tässä vaiheessa ryhmien välillä havaitut tuotantoerot palautuivat hyvin lähelle syklissä 0 havaittuja tasoja. Se on merkittävä se, että maidon tuotanto oli huomattavasti suurempi rbST-ryhmässä kuin kontrolliryhmässä koko tutkimuksen, paitsi aikana sykli 6, kun nämä eläimet tuottivat vain 5% enemmän kuin verrokeilla (Taulukko 2). Valmistajan suositteleman kaksisuuntaisen rbST-annostelun perusteella 70. päivänä hoidettujen eläinten ryhmän olisi pitänyt saada uusi annos rekombinanttia kasvuhormonia., Tätä annosta ei kuitenkaan käytetty, jotta voitaisiin arvioida, voiko rbST-ryhmä palauttaa Pre-dosentin transkriptioprofiilin 28 päivän kuluttua ilman hormonaalista annostelua (Kuva. 1). Mahdollisesti tästä johtuen puute hormoni, tilastollisesti merkittäviä eroja olemassa olevan maidontuotannon ryhmien välillä katosi, korostetaan vaikutuksia rbST maidon tuotannon hinnat (Taulukko 2). Päivänä 84 rBST annettiin uudelleen, ja maidontuotannon merkittävät erot näiden kahden ryhmän välillä lisääntyivät (24%)., Suurin ero on 43% enemmän maitoa hoidettujen eläinten osalta valvonta lehmiä oli havaittu sykli 12, sekä niihin liittyvät ylläpidettävä tuotannon takia rbST ja luonnollinen vähenee kuvio ohjaus naisilla. Kummallista kyllä nämä merkittävät erot säilyivät tutkimuksen loppuun asti, jopa lähes kaksi kuukautta viimeisen annoksen (12.Annos, päivä 168) antamisen jälkeen (Taulukko 2).

RNA: n eristäminen naudan somaattiset solut

Msc: t ovat helppo kerätä lähde RNA-geenin ilmentyminen tutkimuksissa, koska nämä solut voidaan eristää raakamaidon seuraavat hyvin yksinkertainen protokolla. Lisäksi näytteenotto on halpaa ja ei-invasiivista, koska maitoa voidaan kerätä lypsyhuoneessa ilman suoraa kosketusta eläimeen ja siten aiheuttamatta sille stressiä, joka voisi muuttaa saatuja tuloksia. Tässä tutkimuksessa rbST-hoidolla ei ollut merkittävää vaikutusta (P = 0.,099) määrä RNA eristettiin Msc: t, joiden keskimääräinen pitoisuus 120.69 ± 68.31 µg mL−1-näytteet peräisin rbST ryhmä ja 132.36 ± 68.86 µg mL−1-näytteet kontrolliryhmään. Keskimääräinen A260 / 280-suhdearvo oli 1,766 ± 0,095. On mahdollista, että puhdistus vaihe spin sarakkeet lisääntynyt A260/280-suhde ja siksi puhtaus RNA-näytteitä. Vaikka tämän vaiheen sisällyttäminen nostaa näytteen hintaa rutiinianalyysissä, sen avulla voidaan saada näytteitä, joiden puhtaus on korkeampi. Analysoiduissa näytteissä havaittu keskimääräinen RIN-arvo oli 6,88 ± 0.,82 jotkin tekijät voivat vaikuttaa näytteiden eheyteen. Tutkimuksessa käytetyt näytteet olivat maidosta eristettyjä naudan somaattisia soluja. Maidolle on ominaista monimutkainen mikrobiota ja rnaasit, jotka ovat peräisin siitä, että mikrobiota voisi olla vastuussa alhaisemmasta RNA-eheydestä. Lisäksi osa maidossa olevista somaattisista soluista voi osittain hajota. Nämä seikat havaittiin myös tutkimuksessa, jossa käytetään naudan emättimen preparaatti varten transcriptomics tutkimuksia, joilla pyritään löytämään biomarkkereita, joiden avulla jäljittää väärinkäyttö anabolisia agents38., Myös prosessi lypsy, maidon keräily ja kuljetus laboratorioon voi, huolimatta suorittaa mahdollisimman nopeasti, vaikuttaa RNA: n eheys.

rbST: n vaikutus somatotrooppisten akselien geeneihin

tässä tutkimuksessa käytettyjen OpenArray® – levyjen suunnitteluun valittiin 18 geeniä (Taulukko 1). Tämä valinta perustui mahdollisuudet näiden geenien saada ominaisuus rbST transcriptomic allekirjoitus, joka voitaisiin käyttää standardin hallita ab(käyttö) rbST lypsykarjassa., Edellisen geenien ilmentyminen tutkimuksissa rbST oli suunniteltu kuin kerta-annoksen ja yhden näytteenotto tutkimuksia post mortem-rintarauhasen tissue27 tai multi-annos (viisi annosta) tutkimukset veren ja lihasten näytteenotto vivo31. Näitä menetelmiä pidetään invasiivisina, suhteellisen kalliina ja siksi epäkäytännöllisinä valvontatarkoituksiin maitotiloilla. Somatotropiinin osalta valvonta on tehtävä in vivo, koska lopullisena tavoitteena on estää rBST-maidon pääsy maitomarkkinoille.,

tässä tutkimuksessa ilmaus IGF-1 oli ainoa havaittu lainkaan näytteen pistettä yhden lehmän (cow 7) käsitellä rbST ja se ei ole havaittavissa Msc sekä kontrolliryhmään. Se, että se oli vain mahdollista havaita IGF-1 kohde näyte pistettä yksi lehmä voi osoittaa, että on olemassa erilaisia paikallisia rintarauhasen vastauksia eksogeeninen rbST yksilöiden kesken. Useimmat IGF-1-molekyylien löytynyt liikkeessä on sidottu, joilla on korkea affiniteetti yksi tai useampi kuudesta tiedossa IGF-1 sitovia proteiineja (IGFBP-1–6), että moduloida hyötyosuus IGF-1 kohde tissues39., Aiemmissa tutkimuksissa on havaittu, että rbST vaikuttaa voimakkaasti säätelyä IGFBP-5 luustolihasten cattle31 ja downregulates IGFBP-3 rintarauhasen tissue32. Tässä tutkimuksessa ei kuitenkaan havaittu missään vaiheessa IGFBP-3: n eikä IGFBP-5: n transkriptioita. Tämä voi johtua siitä, että MSCs koostuu pääasiassa leukosyteistä40, jossa IGFBP: n tukahduttava vaikutus ei välttämättä ole yhtä tärkeä kuin maitorauhaskudoksessa. Siksi sekä IGF-1 että IGF-1 sitoutuvat proteiinit hylätään tässä tutkimuksessa somaattisten solujen potentiaalimarkkereina.,

Toinen keskeinen osa somatotropic akseli on IGF-1-reseptori (IGF-1R), joka on ensisijainen merkinanto-reseptori IGF-1, joka välittää suurimman osan sen biologisia vaikutuksia. Päivä 1 rbST-ryhmä (0.348 ± 0.131) oli merkitsevästi (P < 0.001) korkeampi suhteellinen runsaus IGF-1R kuin kontrolliryhmässä (0.0898 ± 0.0486). Eri tutkimusten arvioitu pitoisuus rbST veren annon jälkeen havaittiin, että korkeammat pitoisuudet tämä yhdistelmä hormoni löydettiin sen jälkeen, kun rbST administration14,15., Näin ollen merkittäviä eroja havaittu käsitelty ryhmä voisi olla, koska vastauksena IGF-1 syntetisoitu kuin vastaus korkeammat pitoisuudet rbST käsiteltyjen lehmien jälkeen ensimmäinen annos. Kuvassa. 2, se voi olla havaittu, että suhteellisen runsaasti IGF-1R kaksi ensimmäistä sykliä rbST hallinto oli myös merkittävästi suurempi rbST-ryhmässä kuin kontrolliryhmässä monissa näyte pistettä. Kummallista, päivä-84 tutkimuksen suhteellisen runsaasti IGF-1R oli samanlainen rbST-ryhmä (0.070 ± 0.057) ja kontrolliryhmässä (0.110 ± 0.030)., Tämä päivä osui samaan aikaan rbST: n kuudennen annoksen kanssa, ja tämän ja viidennen annoksen välillä oli 14 päivän sijasta 28 päivän tauko. Siksi on mahdollista, että rbST ryhmä talteen fysiologisen tason IGF-1R jälkeen useita päiviä ilman rbST, osoittaa jopa vieroitusoireita alas-asetuksen IGF-1R transkriptio. Tulokset osoittavat, että IGF-1R on mahdollinen hyvä ehdokas sisällytettäväksi geenipaneeliin rBST: n käytön havaitsemiseksi maitotiloilla., Vaikka muut kirjoittajat eivät löytäneet merkittävää vaikutusta rbST IGF-1R tasoa luuston muscle31, tässä tutkimuksessa selkeä vastaus oli havaittu tasoa tämän reseptorin transkriptio vuonna Msc. Tässä mielessä, leukosyytit, neutrofiilit ja monosyytit voi tuottaa kasvuhormonin ja IGF-1 ja ilmaista reseptoreihin, jotka osoittavat, että IGF-1/IGF-1R signalointireittien voi käyttää sääntelyn toimintoja immuunijärjestelmää, mukaan lukien immuunijärjestelmän solujen proliferation41,42. Näiden kahden tutkimuksen ero saattoi johtua käytetyistä eri matriiseista., Msc voisi mahdollisesti vastata paremmin korkeammille tasoille verenkierrossa IGF-1, ja määrä kasvaa reseptorit tämän molekyylin niiden kalvo

Vaikutus rbST on immuunijärjestelmään liittyviä geenejä

tuumorinekroositekijän (TNF) ja interleukiini-1β (IL-1β) ovat kaksi sytokiinien läheisesti immuuni system43., Koska oletettavasti heidän suhteensa, se oli mahdollista tunnistaa samanlaisia suuntauksia suhteellinen runsaus TNF-ja IL-1β selostukset koko tutkimuksen ajan. Se rbST hallinto provosoi merkittävä kasvu suhteellinen runsaus TNF-ja IL-1β selostukset. On syytä mainita, että päivinä, 9, 23 ja 35, suhteellinen runsaus TNF-ja IL-1β olivat merkitsevästi korkeammat rbST-ryhmässä verrattuna kontrolliryhmään (Kuva. 3). Nämä päivät vastaavat rbST-syklien toista viikkoa, noin 7-9 päivää Lactotropina® – injektioiden jälkeen., Siksi on mahdollista, että transcriptomic aiheuttamia muutoksia rbST nämä kaksi sytokiinit ovat enemmän selvää toisella viikolla rbST aikana. Kumma kyllä, päivä 84 (28 päivää sen jälkeen, kun 5 rbST administration), ei ollut merkittäviä eroja ryhmien välillä (Kuva. 3). Tässä yhteydessä muissa aiemmissa tutkimuksissa on käytetty voimakkaita transkriptomisia tekniikoita havaitsemaan anabolisten aineiden käyttö cattle26, 38: ssa., Näissä tutkimuksissa on myös havaittu lisääntynyt transkriptio IL-1β, yksi heistä significantly26, ja tämä on erittäin mielenkiintoinen, koska tarkoitetussa tutkimuksessa käytetään veren soluja, jotka koostumus on hyvin samanlainen, että Msc: t, koska ne ovat suuri osa valkoisia verisoluja. Kuitenkin aiemmin mainittu tutkimuksissa ei ole havaittu vaikutusta anabolisia aineita TNF -, kun taas nykyinen tutkimus havaitsi, vahva vaikutus rbST hallinnon suhteellinen runsaus TNF., Tässä suhteessa, se on raportoitu, että eksogeeninen hallinto rbST imetyksen aikana voi parantaa immuunijärjestelmän vastaus cows44. Itse asiassa, maidon somaattisten solujen määrä lisääntyi aiemmin ja nopeammin lehmät kärsivät coliforme utaretulehduksen, kun rbST oli administered45. Kasvuhormoni ja sen rekombinantti versio osoittavat kykyä moduloida naudan imettävän maitorauhasen tulehdusreaktiota ja neutrofiilien puolustusta45. Tämä voisi selittää TNF: n ja IL-1β: n säätelyn rbST: llä hoidetuilla lehmillä.,

seulontatutkimuksissa transkriptomiikan avulla on hyvin vaikea löytää tiettyä geeniä, jota voitaisiin käyttää erittäin luotettavana geeninä. On huomattava, että sekä IL-1β ja TNF voidaan upregulated muissa prosesseissa, kuten sub-kliininen mastitis46,47. Eri tutkimusten yhdysvalloissa on havaittu, että suuret maatilat ovat todennäköisesti hyväksyä rbST, mikä viittaa siihen, ole vain potentiaalisia maatila-koko osa rbST käyttö ja kannattavuus, mutta myös toimija (ikä ja koulutus) component48,49., Yhdistelmä-somatotropiini on ollut usein raportoitu johto-intensiivinen teknologian käyttöön liittyy muita tuottavuus-suuntautunut teknologioita ja hallinnan käytäntöjä, jotka ovat tyypillisiä suuremmille tiloille, joille harvemmin keskuudessa grazers49,50. Tässä mielessä subkliininen utaretulehdus vähentää maidontuotantoa sairastuneilla lehmillä51. Siksi pitäisi olla mielenkiintoista yhdistää transcriptomic-määritysten tiedot maidontuotantotietoihin., Myös se voisi olla mukana maidon mikrobiologinen määritys epäillään lehmät tunnistaa tärkeimmät taudinaiheuttajat, jotka liittyvät subkliinisen utaretulehduksen. Syrjintäpotentiaalia lisää kuitenkin se, että paneeliin otetaan lisää geenejä.

Vaikutus rbST cell cycle, proliferaatiota, erilaistumista ja tarttuvuus

Se on tietää, että rbST lisää maito proteiinisynteesiä lisäämällä liikevaihto (leviämisen/apoptoosi) ja toimintaa maitorauhasen epiteelisolujen, mikä osoittaa, että rbST vaikuttaa aineenvaihdunnan polkuja, jotka säätelevät solujen liikevaihto/sykli ja metabolism52., Solusykliä säätelevät sykliinit ja sykliiniriippuvaiset kinaasit. Niille, pyöräily kyp D (endoded, jonka CCND1 geeni) koordinaatit solusyklin etenemisen kautta solunulkoisen stimulaatio (esim., kasvutekijä, ravinteiden saatavuus) ja ajaa G1 S-vaiheen eteneminen johtaa solujen mitoosia. Kuitenkin, useimmat aikuisten solut säilyvät lepotilassa tunnetaan G0 vaihe, lepotilassa, ja ne voivat palata solusyklin G1-vaiheen sopivissa mitogenic stimuli53. Tässä tutkimuksessa havaittiin, että rbST hoito vaikuttaa voimakkaasti CCND1 transkriptio., Ennen ensimmäistä rbST-annosta vertailuryhmän ja rbST-ryhmän välillä ei ollut merkittäviä eroja (kuva. 3). Ensimmäisen annoksen jälkeen oli kuitenkin mahdollista havaita merkittäviä eroja näiden kahden ryhmän välillä eri näytteenottopisteissä. CCND1: n suhteellinen runsaus oli merkitsevästi suurempi rbST-ryhmässä kuin vertailuryhmässä kahdessa ensimmäisessä rBST-hoitosyklissä (Kuva. 2). Tämä vaikutus näyttää olevan erityisen ilmeistä 9 päivää sen jälkeen, kun rbST hallinnon, samoin TNF-ja IL-1β selostukset., Niinpä päivinä, 9, 23 ja 35 tutkimuksen suhteellinen runsaus CCND1 oli huomattavasti korkeampi rbST-ryhmässä kuin kontrolliryhmässä (Fig. 3). Päivänä 84 (28 päivää rbST: N 5.antokerran jälkeen) ryhmien välillä ei ollut merkittäviä eroja (kuva. 3) kuten sytokiinien tapauksessa. Myös viimeisenä päivänä (219) näytteenotto (51 päivää sen jälkeen, kun viimeinen rbST annosta) ei ollut merkittäviä eroja (P > 0.05) välillä rbST-ryhmä (0.433 ± 0.141) ja kontrolliryhmään (0.430 ± 0.178)., Siksi, eksogeeninen hallinto rbST aiheuttaa yli-ilmentymä CCND1. Tämä voi johtaa aktivointi solun G0-vaiheessa, ja erityisesti tapauksessa, maitorauhaskudoksen, kasvua maidontuotannon kautta kasvava määrä alveolaarinen soluja rintarauhasen gland54.

Muita geenejä, jotka liittyvät solun sykli on kasvain proteiinia D52-2 (TPD52L2) ja sirtuin 2 (SIRT2). Tavalla samanlaisia, että havaittu CCND1, TNF-ja IL-1β, se oli mahdollista löytää huomattavasti korkeampi (P < 0.001) suhteellinen runsaus SIRT2 selostukset vuonna rbST-ryhmä (1.,517 ± 0.199) kuin kontrolliryhmässä (0.506 ± 0.250) päivänä 23 tutkimuksessa, mutta tässä tapauksessa vain toisella sykli rbST administration (Fig. 4). Kohonneita CCND1 ja SIRT2 selostukset jälkeen toisen hallinnon Lactotropina® – hoitoa saaneessa ryhmässä voi olla seurausta vaikutus ulkoisten rbST solusyklin. Tämän peptidihormonin kierto organismissa johtaisi solusyklin aktivoitumiseen kohdesoluissa., Kuitenkin muissa rbST sykliä, suhdetta annoksen ja muutokset suhteellinen runsaus SIRT2 selostukset ei ole yhtä ilmeistä kuin toinen annos. Lisäksi edellä, on huomattava, että käsiteltyjen ryhmä esitti huomattavasti korkeampi suhteellinen runsaus TPD52L2 selostukset (P < 0.05) aikana 4 päivää sen jälkeen, kun ensimmäinen rbST hallinto. Toinen komponentti on osallisena solujen aineenvaihduntaa, joita sen olennaiset rooli in translation on aitotumallisilla venymä kerroin 1 gamma (EEF1G).,

tässä tutkimuksessa suhteellinen runsaus EEF1G selostukset eivät noudata ilmeinen taipumus liittyvät rbST hallinto., Kuitenkin, niinä päivinä, 17 ja 30 (3 ja 2 päivää sen jälkeen, kun toinen ja kolmas rbST-annoksia, vastaavasti), suhteellinen runsaus EEF1G selostukset oli huomattavasti korkeampi rbST ryhmä. Edellisen study27 päätellä, että rbST hoito lisää tasoja EEF1G selostukset vuonna rintarauhasen kudoksen, mutta sitä käytetään vain yksi näyte, kohta 6 päivää sen jälkeen, kun somatotropiini hallinto. Siksi, se ei ole mahdollista suoraan verrata näitä tuloksia tulokset on saatu tutkimuksessa, jossa 36 näyte pistettä käytettiin transcriptomic määrityksiä aikana 8 kuukautta., Toinen tutkimukseen sisältyvä geeni on maitorasva globule-EGF factor 8-proteiini (MFGE8). Kuvassa. 4, on mahdollista havaita, että MFGE8: n suhteellinen runsaus rbST-ryhmässä vaihteli suuresti näytteenottopäivien välillä. Erityisesti McCoard ym.27 totesi, että 6 päivää rbST: n antamisen jälkeen MFGE8: n suhteellinen runsaus naudan rintarauhaskudoksessa oli suurempi. Kuten edellä mainittiin, tutkimuksessa oli kuitenkin vain yksi datapiste yhden rbST-annoksen jälkeen., Nykyinen pitkän aikavälin multi-annos kokeilu on osoittanut, että transkriptio kuvioita nautaeläinten käsitelty rbST on suuri vaihtelu yli ajan. Esimerkiksi tiedot, jotka on saatu CCND1 osoitti, että vaikutus rbST on transkription joitakin geenejä kasvaa kanssa määrä annoksia. Vaikka on mahdollista, että rbST vaikuttaa transkriptio MFGE8 geeni, saadaan tulokset osoittivat sekä ylös – ja alas-asetuksen., Siksi, MFGE8 ei voi suositella, koska ihanteellinen ehdokas tracing rbST (ab)käyttöä naudoilla, koska se ei ole mahdollista havaita selkeä suuntaus sen transkriptio. Toinen tässä tutkimuksessa arvioitu solujen sitoutumiseen liittyvä geeni on catenin alfamainen 1 (CTNNAL1). Sen transkriptiossa ei kuitenkaan havaittu merkittäviä eroja rbST: n hallinnon seurauksena.

muut geenit

Laktoferriini (LTF) on transferriiniperheeseen kuuluva rautaa sitova glykoproteiini55., Kuvassa 4 esitetään LTF-geenin suhteellinen pitoisuus kaikissa tässä tutkimuksessa arvioiduissa näytepisteissä. Vaikka säätelyä LTF oli havaittu aiemmissa tutkimuksissa anabolisten aineiden cattle38, se ei ollut mahdollista luoda selkeä taipumus LTF suhteessa rbST hoito. Esimerkiksi päivinä 9 ja 53 LTF: n suhteellinen runsaus oli huomattavasti vähäisempää rbST: llä hoidetuilla eläimillä. Päivänä 91 suhteellinen runsaus oli kuitenkin huomattavasti suurempi tuossa ryhmässä. On tarpeen keskustella tuloksista, jotka on saatu kollageenityypin III α1 (COL3A1) geenistä., Aiemmassa tutkimuksessa pääteltiin, että rBST-hoito lypsykarjalle aiheuttaa KOL3A1-geenin säätelyä rintarauhaskudoksessa 6 päivää rbST-hoidon jälkeen27. Nykyisessä työssä ei kuitenkaan pystytty havaitsemaan KOL3A1-geenin transkriptioita. Tässä tutkimuksessa ei myöskään havaittu ESR2-transkriptiota.

paneeli geenien valvoa rbST (ab)käyttää lypsykarjan

lopullinen tavoite tämän työn tarkoituksena oli ehdottaa rutiini paneeli geenit, joiden yhteenlaskettu transkriptio malli mahdollistaisi kehityksen seulontamenetelmä, väärinkäytön valvomiseksi rbST vuonna maitotilojen kautta Msc: t., Toisin kuin muut aiemmat studies27,31,32, tämä työ analysoi transkriptio malleja rbST liittyvien geenien 8-kuukauden real-ehtoja kokeilla myös 12 sykliä rbST hallinto-ja valvontajärjestelmän eläimiä. Tämä lähestymistapa saa tarkempia tietoja saadaan, jotta voidaan erottaa toisistaan rbST-käsiteltyjen lehmien ja ohjaus lehmiä.

Monimuuttuja tilastollinen analyysi oli ajaa valaista muutokset Msc transkriptio kuvioita seurauksena rbST hallinto., Tätä tarkoitusta varten, vain transkriptio yhdeksän geeniä, jotka olivat onnistuneesti mitata koko kokeen (igf1 r, CCND1, TNF, IL1ß, SIRT2, EEFG1, MFEG8, LTF, TDP52L2) käytettiin, lukuun ottamatta geenit, jotka vain on ilmaistu hyvin harvoissa tapauksissa/näytteitä. Tärkein tavoite PCA-analyysi on tunnistaa globaaleja malleja tietoa, havaita korrelaatio eri muuttujien, eli tässä tapauksessa kirjoitusasu eri geenejä., Projektio näytteitä uuteen moniulotteinen tilaa principal components (Kpl) olisi mahdollisesti mahdollistavat eriyttämisen rbST-ja kontrolliryhmissä, korostaen myös niitä geenejä, joilla on suurempi kyky kuin biomarkkerit hoito. PCA-analyysin pistetaulukossa, joka on esitetty kuvassa. 5, ryhmittely suuntaus voisi olla vilahti kaksi ryhmää MSC näytteitä, rbST-hoidettujen eläinten tunnistettu punaiset ympyrät ja ohjaus eläinten kuten mustat laatikot, ja merkitty mukaan kokeellinen päivä., Eri näytteitä rbST ryhmä ilmestyi sekoitettu valvonta vasemmalla puolella tontti, mutta, kumma kyllä, suurin osa niistä vastaa päivän somatotropiini administration (päivän 14, 28, 57 tai 84) tai ensimmäisen 2-3 päivää sen jälkeen, kun annosta (päivinä 2, 3, 17, 44 tai 115), jossa ilmeinen transcriptomic häiriöitä ei havaittu. Päinvastoin, hyvin harvat hallita eläimiä voitaisiin luokitella hoidettujen lehmien KUMPPANUUS-ja yhteistyösopimuksen, ja niiden tilanne selittyy ääriarvot erityisesti huonosti erotteleva geenejä, kuten LTF, MFGE8 tai SIRT2.,

transcriptomic profiilit olivat myös tehty OPLS-DA, josta mahdollisia syrjiviä geenit olivat myös huomautti. Kuvassa. 6a visuaalinen esitys monimuuttuja malli on osoittanut, MSC näytteet ohjata eläimiä piirretään musta neliö ja näytteet rbST ryhmä kuin punaiset ympyrät. PCA: n tavoin useita rbST-näytteitä projisoidaan ellipsin vasemmalla puolella olevien kontrollinäytteiden joukkoon., Kuitenkin, nämä näytteet kerättiin, kun transcriptomic häiriön aiheuttama rbST oli kadonnut (tai ei ollut esiintynyt vielä), niin tiukasti, että ne voitaisiin luokitella valvontaa, että erityinen hetki. Sitä vastoin hyvin harvat kontrollinäytteet luokiteltiin väärin rbST: ksi. Jos testisarjaa ei ole saatavilla, kuten tässä tapauksessa, ristivalidointimenetelmä on tärkein strategia mallin laadun arvioimiseksi. Ristivalidointimenettelyn tulokset esitetään tiivistetysti eri laatuparametrien arvolla., Tässä tutkimuksessa OPLS monimuuttuja malli osoitti seuraavat ominaisuudet: R2(X) = 0.6, R2(Y) = 0,4 ja Q2 = 0.3. Malli selittää 60% x-avaruuden vaihtelusta ja 40% y-avaruuden vaihtelusta, ja ennustamisen hyvyys on 30%. Nämä arvot osoittavat suhteellisen hyvän kuvauksen tiedoista mallin ja keskimääräisen ennustettavuuden mukaisesti34. P-arvo on laskettu CV-ANOVA oli 3.01 × 10-7, mikä viittaa siihen, että on olemassa merkittäviä erot välillä kaksi luokkaa malli., Se, että tämä malli oli rakennettu paneeli geenien eri erotteleva kyky ei pidä jättää huomiotta, koska se vaikuttaa erotteleva voima OPLS. Lisäksi, ne kokeellinen päivää kanssa erittäin vähän tai ei rbST-vaikutus niiden selostukset ovat varmasti painottaminen malli, sillä käytännössä ne kuuluvat yhteen ryhmään, mutta toimia kuin muut., Tulevaisuudessa monimuuttuja seulonnan malleja, paneeli valittu erittäin erotteleva geenit on käytettävä, ja mieluiten, ”tunnettu” ja ”tuntematon” näytteiden ennustetaan vuonna monimuuttuja malli, kuuluu samanlainen väestön (ikä, rotu, jne.) ja imetyshetket, pyrkimyksenä voittaa eläinten välinen variabiliteetti 35. Tällainen lähestymistapoja, se on myös tärkeää, että ennakoiva väestöstä on suurempi kuin ennustettu näytteitä. Lopulta OPLS-DA: n syrjinnän syyt tutkittiin vastaavassa s-juonessa(Kuva., 6b), joka paljasti kunkin muuttujan (geenin transkriptio) osuuden kahden näyteluokan erottamisessa. Kuten kommentoi aikaisemmissa osissa, eniten erotteluanalyysi transkriptio MSC löytyi CCND1, IGF-1R, TNF-ja IL-1β geenit. Se näyttää selvältä, että rbST hoitoja laukaista säätelyä nämä geenit ja niiden käyttöä tulevaisuudessa seuranta-paneelit on lupaava vaihtoehto rutiini control in dairy.,

Kuten rutiininomainen ohjaus tunnistaa laittoman käytön rbST, joilla tämä geeni paneeli, ei olisi mitään tietoa, kun lehmät on käsitelty (toisissa sanoen, se on sokea koe), mieluiten joka päivä imetyksen aikana pitäisi olla näytteitä/hallinnassa. Käytännön kannalta tämä ehdotus kuulostaa kuitenkin hieman epärealistiselta. Se, mitä ehdotetaan, on satunnainen kokoelma maitoa kerran viikossa, vuorottelevat viikonpäivät., Somatotropiini on antaa säännöllisesti koko imetyksen ajan (alkaen 80-100 päivää synnytyksen, bi-viikoittain), kaikissa imettäville lehmän tilalla, jolla on hyvä näytteenottosuunnitelma, jossain vaiheessa rbST pitäisi olla havaittu tilalla. Se transcriptomic saadut tiedot otetut näytteet on otettava verrattuna transcriptomic datajoukon ohjaus väestöstä. Niitä näytteitä, jotka esittivät tässä asiakirjassa ehdotettuja suurempia geeniarvoja, olisi pidettävä epäilyttävinä. Toisessa vaiheessa olisi tutkittava kunkin ”positiivisen” lehmän erityistilanne (utaretulehdus, raskaus jne.,), ja tarvittaessa jatkaa vahvistavaa analyysiä. On tärkeää korostaa myös high-throughput valmiuksia reaaliaikainen PCR-lähestymistapa, jolloin mahdollista näytteenottosuunnitelma.