célok
- Ismerje meg a Staphylococcus nemzetség speciációját.
- különböző staphylococcus Fajok szaporítása és azonosítása szelektív és differenciál agar
- azonosítsa a vér agar 3 hemolitikus típusát.,
a Staphylococcus a Micrococcaceae családba tartozó gram +, nem Spore-formáló cocci nemzetség, amelyet gyakran a bőr és az orrüreg normál emberi mikrobiótájaként találnak. Ebben a nemzetségben öt organizmus tekinthető potenciális emberi kórokozónak: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus, S. haemolyticus és S. hominis, de az első három a leggyakoribb izolátum. Az S. aureust gyakran tekintik a három kórokozó közül a legproblematikusabbnak, és megkülönböztetik a másik kettőtől azáltal, hogy az egyetlen, aki képes koagulálni a plazmát. S., aureusis képes okozni sok felületes pyogenic (genny-formáló) fertőzések a bőrben és a mögöttes szövetek, valamint a súlyos szisztémás fertőzések. Számos toxint képes előállítani, beleértve az enterotoxinokat (ételmérgezés), a citotoxinokat (általános szisztémás toxinok) és a toxikus sokk szuperantigéneket. A többi koaguláz-negatív staphylococcus (S. epidermidis és S. saprophiticus) sokkal ritkábban fordul elő kórokozóként, de alkalmanként endocarditishez, protézis ízületi fertőzésekhez és sebfertőzésekhez társul,csak hogy néhányat említsünk.,
Ez a gyakorlat lehetőséget ad arra, hogy szelektív médiát használjon, ebben az esetben magas nátrium-kloridon alapul (az MSA és az SM1 10 egyaránt szelektív közeg a staphylococcusok izolálásához – 7, 5% NaCl). A szelektív közeg gátló szerrel rendelkezik, amely elősegíti bizonyos baktériumok növekedését mások gátlásával. Az MSA egy további mutatót tartalmaz a mannit fermentáció megfigyelésére, ami differenciál közeggé is teszi., A magas NaCl jelenlétében növekedő baktériumok közül néhány halofil (bizonyos só koncentrációt igényel a növekedéshez), míg más halodurikus (ne használja a sót, de elviseli). A staphylococcusnem halofil, hanem halodurikus, mivel magas NaCl koncentrációban élhet vagy elviselhet. Az SM1 10 és az MSA magas sótartalma gátolja más gyakori bőr mikroorganizmusokat. Az ebben a gyakorlatban használt másik média a patogén Staphylococcus megkülönböztetésére a nem patogénektől, valamint a faj azonosítására szolgál.,
nem csak sórezisztens, a Staphylococcus mindig fakultatív anaerob. Ha festett, kis klaszterekben (staphylo = klaszter) látható. A Staphylococcus általában béta-hemolitikus vagy egyáltalán nem hemolitikus (gamma hemolízisnek nevezik). A patogén staphylococcusok számos virulencia tényezőt termelhetnek, beleértve a toxinokat, a koagulázt, a leucocidineket, valamint a hidrolitikus enzimeket, amelyek károsíthatják a gazdaszervezet szöveteit.
a vér agar (BAP) 5% juhvérből készül. Ez egy gyakori tápközeg, amelyet baktériumok tenyésztésére használnak, mert:
- ez egy nagy gazdagító közeg az igényes baktériumok számára.,
- a vérsejtek hemolízise nagyon hasznos lehet azonosítási tesztként.
a CNA agar a vér agar egyik típusa. Az egyetlen különbség az, hogy a CNA rendelkezik egy antibiotikummal, a naladixinsavval, amely gátolja a gram – baktériumokat.
a hemolízis a vörösvértestek lebomlása. A hemolizinek egyes baktériumok által termelt enzimek, amelyek a baktérium kolónia körüli közegbe kerülnek. Ez lehet a sejtek teljes lebontása, a hemoglobin felszabadulásával, valamint a vörös tisztításával a kolónia körüli környező közegből., Vagy a hemolízis részleges bontás lehet, ami zöldes vagy zöld-sárga zónát eredményez a kolónia körül.,i>
azonosítási eljárás vázlata
1.munkamenet ⇒ 3. munkamenet ⇒ 3. ülés
CNA DNAse coagulase run egyéb szükséges vizsgálatok azonosítani Fajok
MSA sm110 onpg
kataláz oxidáz
gram fenol vörös laktóz
folt húsleves
az eljárások
megjegyzés
feltétlenül tartsa meg az izolátumok összes vizsgálati eredményének listáját.,
1. munkamenet
- minden táblázat Ana vagy TSA lemezen növekvő Staphylococcus fajt kap.
- izolációs csík technikával oltsa be a Columbia naladixinsavat (CNA), és helyezze a novobiocin lemezt az 1.szakaszba.
- a Novobiocin érzékenység kulcsfontosságú megkülönböztető tulajdonság a Staphylococcus Fajok között. Helyezze a csipeszeket az alkoholba, majd sterilizálja a csipeszeket úgy, hogy gyorsan futtatja őket a lángon. Az alkohol kigyullad, majd a csipeszből elpárologtatva steril lesz., Most kiválaszthat egy novobiocin lemezt a tartóból, hogy a CNA lemezre helyezze—az első csíkszakaszban (ahol a baktérium összefolyó növekedése lesz).
- a többi agar lemez esetében-SM 110 lemez, mannit só agar (MSA) lemez, DNAse agar lemez—a lemez közepén lévő inokulációs vonal megfelelő a növekedési eredményekhez.
- inkubáljuk a táptalajt 37°C-on.
- futtassuk az oxidáz-és katalázteszteket lemezkultúrán.
- Gram folt az izolátumot, hogy alakja és elrendezése, valamint a gram reakció.
- a következő munkamenetben elvégezzük az ONPG tesztet., Ez a teszt egy génkészlet, a lac operon bekapcsolását igényli. Ennek a tevékenységnek a kiváltásához a baktériumot laktóznak kell kitenni. Ez az oka annak,hogy beoltja a fenolvörös laktóz levest is.
2. munkamenet
- menjen az egyes laboratóriumi gyakorlatokhoz a mannit-só és a DNáz teszt értelmezéséhez (HCl-t igényel).
- a CNA lemezen 2 reakció—érzékenységet vizsgál a novobiocin antibiotikumra és a vér hemolízisére.,
- Novobiocin érzékenység – Egy zóna 17 mm-es azt jelzi, érzékenység
- Hemolitikus reakció :
- alfa (α) hemolízis–zöld övezet körül kolónia, a szivárgó hemoglobin át biliverdin, úgynevezett részleges hemolízis
- béta (β) hemolízis–teljes tisztás körül kolónia által okozott bontása Vvt által streptolysin enzimek
- gamma (γ) hemolízis – nem hemolysins, nem zóna
- Staphylococcus faj vagy béta hemolyticus vagy gamma (nem hemolitikus)., A Staph aureus alfa-toxint termel, amely általában a béta (teljes) hemolízis széles zónáit okozza.
- ellenőrizze az SM 110-et a növekedés és a pigment szempontjából. Tápanyagok és vitaminok ebben a közegben fokozza a pigmentáció a patogén Staphylococcus, azok kolóniák egyre ajellow-narancs kolónia.
- futtassa a koaguláz tesztet: ehhez a teszthez kapcsolódik egy kapcsolódó gyakorlat. Csak néhány Staphylococcus faj van, amelyek pozitívak a koaguláz teszt szempontjából (lásd az alábbi táblázatot), S. aureus pedig a leggyakoribb., Mivel 2 féle koaguláz enzim kötődik és szabad – – – van 2 különböző vizsgálatok, hogy lehet használni, hogy azonosítsa ezeket az enzimeket. A cső módszer a 2, a legmegbízhatóbb végleges tesztje. A laboratóriumi kézikönyvben található koaguláz teszt gyakorlat egyértelműen leírja ezeket a 2 változatot.
- az ONPG teszt fut. Nézze meg a laboratóriumi gyakorlatokat erre a tesztre a teszt futtatásának irányairól. Mivel a csőben nagyon kevés folyadék van, a cső tetejét le kell fednie, majd a csövet tetejére kell helyezni. Ez csökkenti a kiszáradást.,
3rd Session
- a Staphylococcus azonosításban alkalmazott fő vizsgálati reakció a koaguláz tesztreakció, amely a Staphylococcus nemzetséget 2 csoportra osztja—koaguláz negatív fajok és koaguláz pozitív Fajok. Az azonosításhoz használt vizsgálati adathordozó attól függ,hogy melyik kategóriába tartozik a szervezet. Érdemes lehet futtatni néhány, a következő vizsgálatok.,
- Available media:
- arginine and ornithine
- decarboxylase broths
- urea broth
- ONPG
- sucrose, trehalose, maltose sugars
- VP broth
- nitrate broth
- If you have a coagulase positive Staph, there are only a few species available as your choice: there is a table with those species below.,
- ha az organizmusai koaguláz negatívak, ellenőrizze az alábbi folyamatábrát, valamint a Bergey kézikönyvét vagy más azonosító könyveit.
- futtassa az azonosításhoz szükséges vizsgálatokat. ÖN DÖNTI EL, HOGY MILYEN EXTRA TESZTEKET KELL FUTTATNI A VILÁGOS AZONOSÍTÁSHOZ.
4th Session
- olvassa el az utolsó munkamenet összes tesztjét (lásd a laboratóriumi gyakorlatokat a teszt értelmezéseiről.
- írjon egy jelentést a Staphylococcus Fajok azonosításáról, ha az oktató erre utasítja Önt.,
| Tube coagulase | Acid from trehalose | VP test | ONPG test | |
| S. aureus | + | + | + | – |
| S. intermedius | + | + | – | + |
| S., hyicus | variable | + | – | – |
| S. schleiferi | + | – | + | ? |
Common coagulase negative Staphylococcal species
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophiticus | |
| Alpha toxin (ß-hemolysis) | + (most strains) | – | – |
| Growth on 7.,acace93570″>DNase production | + (usually) | – | – |
| Sensitivity to novobiocin | sensitive | sensitive | resistant |
* Novobiocin sensitivity = >17mm zone size
QUESTIONS
- Which type of hemolysis is often associated with pathogenicity?,
- melyek a Staphylococcus nemzetség megkülönböztető jellemzői?
- meg tudja adni az S. aureus tesztre adott reakcióját az összes főbb run—MSA, SM110, koaguláz, kataláz, oxidáz és DNáz vizsgálathoz?
- mi történik az RBC-kkel béta-és alfa-hemolízisben?
-
Jackie Reynolds, a biológia professzora (Richland College)
