LABORATÓRIUMI DIAGNÓZIS A HAEMOGLOBINOPATHIES
Az elsődleges vizsgálat egy haemoglobinopathy tartalmaznia kell egy teljes vérkép, perifériás vér film hemoglobin elektroforézis (lásd Fig. 29.4). A teljes vérkép lehetővé teszi a hemoglobinképződés értékelését a vörösvértest-indexek, az átlagos sejttérfogat (MCV) és az átlagos sejt-hemoglobin (MCH) alapján., Mikrocitózis (MCV < 76 fL) és hypochromia (MCH < 27 pg) egy normál vagy emelt vörösvértestszám (> 5,5 × 1012/L) esetén egy vassejtes betegben, thalassaemia diagnózisa. Β thalassaemia major vagy intermedia esetén ez jelentős mértékű anaemiával jár, míg thalassaemia esetén a hemoglobin általában normális, vagy csak csekély mértékben csökken. A Giemsa módszerrel festett vérfilm vizsgálata hasznos lehet a diagnózis megerősítésében., A végleges diagnózis azonban gyakran a vörösvérsejtes hemolizátumok hemoglobinszintjének elektroforetikus vagy kromatográfiás elemzésén alapul. Cellulóz-acetát elektroforézis a lúgos pH (8.9–9.1) a legszélesebb körben használt módszer, hogy egyszerű, gyors, olcsó, hatékony a elválasztja a közös hemoglobin változatok. Homozigóta sarlósejtes anaemiában a HbS dominál. Változó mennyiségű HbF van jelen, magasabb arányok (> 10%) általában enyhébb klinikai lefolyással társulnak. A hemoglobin A2 koncentrációja általában normális.,
Oldhatósági vizsgálatok alapján a csökkentett oldhatósága deoxy-HbS jelenlétében redukáló szerekkel, például a nátrium-dithionite, korlátozott szerepe a diagnózis a sarlósejtes betegség, mivel nem különbözteti meg a homozigóta betegség hordozó államok. Vészhelyzetben a jelentősen csökkent hemoglobinszinttel és a tipikus vörösvértest-morfológiával együtt végzett pozitív oldhatósági teszt erősen a sarlósejtes betegség diagnózisára mutat. Ezt a lehető leghamarabb hemoglobin-analízissel kell megerősíteni., Számos más változat, köztük a HBD, a HbG és a Hb Lepore, elektroforetikus mobilitása megegyezik a cellulóz-acetát HbS-ével, de megkülönböztethető a negatív sarló oldhatósági teszttel és a citrát agar gél elektroforézissel savas pH-n (6.0). Hasonlóképpen, a C, E és O hemoglobinok, amelyek lúgos pH-n a cellulóz-acetáton együtt vándorolnak, citrát agar elektroforézissel differenciálhatók. Mind a HbE, mind a Hb Lepore összefüggésbe hozható a thalassaemiás vörösvérsejt-indexekkel, ami tovább segíti az elektroforetikusan hasonló változatoktól való megkülönböztetésüket., Az izoelektromos fókuszálás javítja egyes szerkezeti változatok felbontását, valamint a Guthrie (szárított vérfoltok) kártyákból származó eluátumok újszülöttkori szűrésére is használható, mivel csökkenti az ilyen mintákban jelen lévő methemoglobin interferenciáját.
nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) egy gyors és érzékeny módszer a hemoglobinok szétválasztására és mennyiségére, amely bizonyos esetekben lehetővé teszi a változatok más technikákkal történő azonosítását., Mivel nagyrészt automatizált, és kis mennyiségű mintát igényel, a HPLC lett a választás módja a nagyszabású populációs teszteknek, például az újszülöttkori szűrőprogramoknak. Az USA-ban és Angliában már egy ideje alkalmazzák a sarlósejtes betegségek általános újszülöttkori szűrését, és hasonló programokat vezetnek be más európai, Közel-keleti és afrikai országokba is, a rendelkezésre álló feltételek és források prevalenciájától függően., Az ilyen programok jelentős előnyökkel jártak a jobb gondozás, a pneumococcus fertőzés elleni profilaxis korai végrehajtása és a szülői nevelés következtében csökkent mortalitás és morbiditás tekintetében. Β thalassaemiában az egyes hemoglobinok aránya az alapul szolgáló genotípustól függően változik. A homozigóta β0 thalassaemia a HbF túlsúlyával, a HbA hiányával és a változó mennyiségű HbA2–vel (tartomány: 1,0-6,0%, átlag: 1,7%) társul. Homozigóta β+ thalassaemiában vagy heterozigóta β0/β+ thalassaemiában szenvedő egyénekben változó mennyiségű HbA van jelen., Az F hemoglobin emelkedett és heterogén módon oszlik el a vörösvértestek között.
a hba2 HPLC-vel vagy mikrocolumn-kromatográfiával történő pontos mennyisége elengedhetetlen a β thalassaemia tulajdonságának diagnosztizálásához, amelyben a HbA2 emelkedett, jellemzően > 3, 5%., A fuvarozók, a ‘normális A2’ vagy ‘néma’ β thalassaemia miatt enyhe β gén hibák, vagy co-örökség egy δ gén mutációja cisz vagy transz nem könnyen meg lehet különböztetni a α thalassaemia a hagyományos szűrési módszereket igényelnek vizsgálat speciális technikák, beleértve az in vitro globin lánc szintézisét, valamint a DNS-elemzés. Elemzés a globin lánc szintetikus arányok által tritiated leucin beépítése, valamint karboximetil-kromatográfia a végleges azonosításának módját az egyének thalassaemia, bár ez ritkán használják, mert a fáradságos természet.,
az α thalassaemiát elektroforetikusan a gyorsan mozgó változatok, a HB Bart (γ4) és a HBH (β4) jelenléte jellemzi, amelyek az újszülött mintákban a legnyilvánvalóbbak. A homozigóta α0 thalassaemia következtében kialakuló hydrops fetalis-ban a Hb Bart túlsúlyban van, és kisebb mennyiségben megtalálható más α thalassaemia szindrómákban az újszülöttkorban. Haemoglobin H is kimutatható festéssel HBH inclusion szervek., Az α thalassaemia klinikailag csendes formáinak diagnosztizálása gyakran kizárás, amelyet az alany etnikai származása, mikrocita hipokróm vörösvérsejt-indexek és normál vagy alacsony HbA2-koncentráció alapján végeznek normál vas-státusz jelenlétében. A végleges diagnózist DNS-analízissel lehet elvégezni, amely szintén gyakran különbözteti meg az α0-t és az α+ thalassaemiát.,
míg a hemoglobinopátiák többsége hemoglobinelektroforézissel diagnosztizálható, a töltést nem megváltoztató aminosav-szubsztitúciók által okozott variánsok, mint például néhány instabil hemoglobinban vagy megváltozott oxigén affinitással rendelkező hemoglobinokban, elkerülhetik a kimutatást. További, ebben az összefüggésben hasznos vizsgálatok közé tartozik a hemoglobin instabilitás és az oxigén affinitás értékelése., Nagy forgalmú DNS-elemzést tett ez egy lehetséges módja a szűrővizsgálat a globin mutációk gazdagabb országokban, technikákat, mint például multiplex lekötésével-függő szonda hangerősítő azonosítását lehetővé tevő nagy gén mutációk, amelyek korábban csak kimutatható segítségével Southern blot. A hemoglobin-tömegspektrometria felhasználható a rendellenes globinok azonosítására is tömegük pontos mérésével, különös tekintettel a már tömegspektrometriát alkalmazó szűrőprogramokban való lehetséges alkalmazásra.,
a súlyos hemoglobinopátiák kockázatának kitett Párok anatómiai vagy prekoncepciós szűréssel történő azonosítása lehetővé teszi a reproduktív választás tájékoztatását a prenatális diagnózis lehetőségével. A legtöbb esetben ez már az első trimeszterben megvalósítható a mutáns globin gének kimutatásával a korionos villous DNS-ben. Több országban, nevezetesen Cipruson, ahol a β-thalassaemia hordozói aránya eléri a 12% – ot, ez a hemoglobin-rendellenességek születési előfordulásának jelentős csökkenéséhez vezetett., A preimplantációs genetikai diagnózist egyre inkább használják az érintetlen embriók kiválasztásának lehetővé tételére, bár ez továbbra is igényes és drága folyamat, amely nem alkalmazható a legtöbb párra. A kísérletek továbbra is nem invazív prenatális diagnózist eredményeznek magzati sejtek és DNS felhasználásával az anyai vérben, bár ez jelenleg a hemoglobinopátiák rutinszerű eljárásaként technikailag nem kivitelezhető.
