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La colorazione Acid-fast (AF), nota anche come rilevamento microscopico delle macchie di Ziehl-Neelsen, sviluppata oltre un secolo fa, è ancora oggi il metodo diagnostico più utilizzato per la tubercolosi., Qui presentiamo una breve rassegna storica dell’evoluzione dei metodi di colorazione AF e discutiamo il paradosso di Koch, in cui i bacilli tubercolari non AF possono essere rilevati in pazienti affetti da tubercolosi o in animali infetti sperimentalmente. La conversione del Mycobacterium tuberculosis da una forma AF-positiva in crescita attiva a una forma AF-negativa non replicante durante il corso dell’infezione è ora ben documentata., I meccanismi di perdita della resistenza all’acido non sono completamente compresi ma coinvolgono importanti processi metabolici, come l’accumulo di inclusioni intracellulari contenenti triacilglicerolo e cambiamenti nella composizione e nell’architettura spaziale della parete cellulare. Sebbene i componenti precisi responsabili del metodo di colorazione AF rimangano in gran parte sconosciuti, analisi di una serie di M geneticamente definiti., i mutanti della tubercolosi, che sono attenuati nei topi, hanno indicato il ruolo primario degli acidi micolici e di altri lipidi associati alla parete cellulare (glico)come marcatori molecolari responsabili della proprietà AF dei micobatteri. Sono ora necessari ulteriori studi per descrivere meglio la riorganizzazione della parete cellulare che si verifica durante la dormienza e per sviluppare nuove procedure di colorazione che non siano influenzate da tali alterazioni della parete cellulare e che siano in grado di rilevare le cellule AF-negative.