Obiective
- familiarizeze cu specii din genul Staphylococcus.
- Crește și de a identifica diferite specii de stafilococi utilizează selectiv și diferențial agar
- Identifica 3 hemolitic tipuri pe agar sânge.,Staphylococcus aureus este un gen de Gram +, cocci non-Formatoare aparținând familiei Micrococcaceae, care sunt adesea găsite ca microbiota umană normală a pielii și a cavității nazale. Există cinci organisme să ia în considerare ca potențiali agenți patogeni umani în acest gen: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus, S. haemolyticus, și S. hominis, dar primele trei sunt cele mai comune izolate. S. aureus este adesea considerat cel mai problematic dintre cei trei agenți patogeni și se distinge de ceilalți doi prin faptul că este singurul capabil să coaguleze plasma. S., aureuseste capabil să provoace multe infecții superficiale pyogenice (care formează puroi) ale dermei și țesuturilor subiacente, precum și infecții sistemice grave. Poate produce o serie de toxine, inclusiv enterotoxine (intoxicații alimentare), citotoxine (toxine sistemice generale) și superantigene de șoc toxic. Alte stafilococi coagulazo-negativi (S. epidermidis și S. saprophiticus) sunt mult mai puțin frecvent ca agenți patogeni, dar sunt uneori asociate cu endocardita, proteze articulare,și infecții ale plăgii, pentru a numi doar câteva.,acest exercițiu vă oferă posibilitatea de a utiliza medii selective, în acest caz pe bază de clorură de sodiu ridicată (MSA și SM1 10 sunt ambele medii selective pentru izolarea stafilococilor – 7,5% NaCl). Un mediu selectiv are un agent inhibitor care favorizează creșterea anumitor bacterii prin inhibarea altora. MSA conține un indicator suplimentar pentru monitorizarea fermentației manitolului, ceea ce îl face și un mediu diferențial., Dintre bacteriile care pot crește în prezența NaCl ridicat, unele sunt halofile (necesitând o anumită concentrație de sare pentru a crește), în timp ce altele sunt halodurice (nu folosiți sarea, dar o puteți tolera). Stafilococul nu este halofil, ci mai degrabă haloduric, prin faptul că poate trăi sau suporta concentrații mari de NaCl. Conținutul ridicat de sare din SM1 10 și MSA inhibă alte microorganisme comune ale pielii. Celelalte medii utilizate în acest exercițiu sunt pentru diferențierea stafilococului patogen de nepatogen și pentru identificarea speciei.,nu numai rezistent la sare, stafilococul este întotdeauna facultativ anaerob. Când este colorat, acesta va fi văzut în grupuri mici (staphylo = cluster). Stafilococul este de obicei fie hemolitic beta, fie deloc hemolitic (numit hemoliză gamma). Stafilococii patogeni pot produce o varietate de factori de virulență, inclusiv toxine,coagulază, leucocidine și enzime hidrolitice care pot deteriora țesuturile gazdă.agarul de sânge (BAP) se face cu 5% sânge de oaie. Este un mediu comun folosit pentru cultura bacteriilor, deoarece:
- Este un mediu de îmbogățire mare pentru bacteriile fastidioase.,
- hemoliza celulelor sanguine poate fi foarte utilă ca test de identificare.agar CNA este un tip de agar de sânge. Singura diferență este că CNA are un antibiotic, acidul naladixic, care inhibă bacteriile gram.
hemoliza este defalcarea celulelor roșii din sânge. Hemolizinele sunt enzime produse de unele bacterii și sunt eliberate în mediul din jurul coloniei bacteriene. Poate fi o defalcare completă a celulelor, cu eliberarea hemoglobinei și o curățare a roșului din mediul înconjurător din jurul coloniei., Sau hemoliza poate fi o defalcare parțială, rezultând o zonă verzui sau verde-Galben în jurul coloniei.,i>
- VP bulion
- nitrat de bulion
- thioglycollate bulion (pentru anaerobe de creștere)
SCHEMA DE IDENTIFICARE PROCEDURĂ
1 sesiune ⇒ a 2-a sesiune ⇒ 3-a sesiune ⇒ a 4-a sesiune
CNA DNAse Coagulazo Rula alte teste Identifica specii
MSA SM110 ONPG
Catalaza Oxidaza
Gram roșu de Fenol lactoză
Pata Bulion
PROCEDURI
Nota
asigurați-vă că păstrați o listă cu toate rezultatele testelor pentru izolează.,
prima sesiune
- fiecare tabel va primi o specie stafilococică care crește pe placa aNA sau TSA.
- folosind o tehnică cu bandă de izolare, inoculați acidul Naladixic Columbia (CNA) și plasați discul novobiocin în secțiunea 1.sensibilitatea Novobiocinei este o caracteristică cheie de diferențiere între unele specii de stafilococi. Puneți forcepsul în alcool și apoi sterilizați forcepsul alergându-le rapid prin flacără. Alcoolul se va aprinde și atunci când se evaporă din forceps, acestea vor fi apoi sterile., Acum Puteți alege un disc novobiocin din suport pentru a plasa pe placa CNA-în prima secțiune a benzii (unde va exista o creștere confluentă a bacteriei).
- pentru celelalte plăci de agar-placă SM 110, placă de agar de sare manitol (MSA), placă de agar DNAse—o linie de inoculare în centrul plăcii este adecvată pentru rezultate de creștere.
- incubați mediile la 37°C.
- rulați testele de oxidază și catalază pe cultura plăcii.
- Gram colorați izolatul pentru a obține forma și aranjamentul, precum și reacția gram.
- vom face testul ONPG în următoarea sesiune., Acest test necesită activarea unui set de gene, operonul lac. Pentru a induce această activitate, bacteria trebuie expusă la lactoză. Acesta este motivul pentru care veți inocula și un tub de bulion de lactoză roșie fenol.
A 2-A sesiune
- du-te la exerciții individuale de laborator pentru a interpreta sarea manitol și testul DNAse (necesită HCl).
- pe placa CNA, verificați 2 Reacții – – – sensibilitate la antibioticul novobiocin și hemoliza sângelui.,
- Novobiocin sensibilitate – O zonă de 17 mm indică sensibilitatea
- Hemolitică reacții :
- alfa (α) hemoliza–zona verde din jurul coloniei, cauzate de scurgerile de hemoglobina convertit la biliverdin, numit parțială hemoliza
- beta (β) hemoliza–compensare completă în jurul coloniei, cauzat de distrugerea Hematiilor de către streptolysin enzime
- gamma (γ) hemoliza – nu hemolysins, nici zona
- specii de Staphylococcus sunt fie beta hemolitic sau gamma (nu hemolitic)., Stafilococul aureus produce toxina alfa care cauzează de obicei zone largi de hemoliză beta (completă).
- verificați SM 110 pentru creștere și pentru pigment. Nutrienții și vitaminele din acest mediu sporesc pigmentarea stafilococului patogen, acele colonii devenind colonii galben-portocalii.
- rulați testul de coagulază: există un exercițiu legat pentru acest test. Există doar câteva specii de stafilococ care sunt pozitive pentru testul de coagulază (vezi tabelul de mai jos), iar S. aureus este cel mai frecvent., Deoarece există 2 tipuri de coagulază enzimă-legat și liber – – – există 2 teste diferite, care pot fi utilizate pentru a identifica aceste enzime. Metoda tubului este testul definitiv al 2, cel mai fiabil. Exercițiul de testare a coagulazei din manualul de laborator descrie în mod clar aceste 2 versiuni.
- testul ONPG va fi rulat. Uită-te în exercițiile de laborator pentru acest test pentru direcțiile cu privire la modul de a rula testul. Deoarece există foarte puțin lichid în tub, veți dori să acopere partea de sus a tubului va parafilm și apoi puneți tubul de sus peste care. Acest lucru reduce deshidratarea.,
3-a Sesiune
- test major de reacție pentru a utiliza în identificarea Staphylococcus este testul coagulazei reacție, care împarte genul Staphylococcus în 2 grupe—coagulazo negativ specii și coagulazo pozitiv specii. Mediile de testare pe care le veți rula pentru identificare depind de categoria în care se încadrează organismul dumneavoastră. Poate doriți să executați unele dintre următoarele teste.,
- Available media:
- arginine and ornithine
- decarboxylase broths
- urea broth
- ONPG
- sucrose, trehalose, maltose sugars
- VP broth
- nitrate broth
- If you have a coagulase positive Staph, there are only a few species available as your choice: there is a table with those species below.,
- dacă organismele dvs. sunt coagulaze negative, verificați diagrama de mai jos, precum și manualul Bergey sau alte cărți de identificare.
- executați testele necesare pentru identificare. DEPINDE DE TINE PENTRU A DETERMINA CE TESTE SUPLIMENTARE PENTRU A RULA PENTRU O IDENTIFICARE CLARĂ.
A 4-A sesiune
- citiți orice teste din ultima sesiune (consultați exercițiile de laborator pentru informații despre interpretările testelor.
- scrieți un raport pentru identificarea speciilor de stafilococ, dacă instructorul dvs. vă îndrumă să faceți acest lucru.,
| Tube coagulase | Acid from trehalose | VP test | ONPG test | |
| S. aureus | + | + | + | – |
| S. intermedius | + | + | – | + |
| S., hyicus | variable | + | – | – |
| S. schleiferi | + | – | + | ? |
Common coagulase negative Staphylococcal species
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophiticus | |
| Alpha toxin (ß-hemolysis) | + (most strains) | – | – |
| Growth on 7.,acace93570″>DNase production | + (usually) | – | – |
| Sensitivity to novobiocin | sensitive | sensitive | resistant |
* Novobiocin sensitivity = >17mm zone size
QUESTIONS
- Which type of hemolysis is often associated with pathogenicity?,
- care sunt caracteristicile distinctive ale genului Staphylococcus?
- puteți da reacția de testare a lui S. aureus pentru fiecare dintre testele majore rulate – – – MSA, SM110, coagulază, catalază, oxidază și DNAse?
- ce se întâmplă cu RBC-urile în hemoliza beta și alfa?
contribuitori și atribuții
-
Jackie Reynolds, profesor de Biologie (Richland College)
