DIAGNOSTICUL DE LABORATOR al HEMOGLOBINOPATII
primar anchetă de o haemoglobinopathy ar trebui să includă un complet de sânge conta, sângele periferic film și electroforeza hemoglobinei (vezi Fig. 29.4). Hemoleucograma completă permite evaluarea formării hemoglobinei, evaluată după indicii eritrocitelor, volumul mediu al celulei (MCV) și valoarea medie a hemoglobinei (MCH)., Microcytosis (MCV < 76 fL) și hipocromia (MCH < 27 pg), în fața unei normal sau crescut numărul de celule roșii (> 5.5 × 1012/L) într-un fier plin pacient, sugerează diagnosticul de talasemie. În cazul β talasemiei majore sau intermedia, aceasta se asociază cu un grad semnificativ de anemie, în timp ce în cazul talasemiei hemoglobina este de obicei normală sau redusă doar puțin. Examinarea unui film de sânge colorat printr-o metodă Giemsa poate fi utilă în confirmarea diagnosticului., Cu toate acestea, diagnosticul definitiv se bazează adesea pe analiza electroforetică sau cromatografică a hemoglobinei în hemolizatele eritrocitare. Electroforeza acetat de celuloză la pH alcalin (8.9-9.1) este cea mai utilizată metodă, fiind simplă, rapidă, ieftină și eficientă în separarea variantelor comune de hemoglobină. În siclemia homozigotă predomină HbS. O cantitate variabilă de HbF este prezentă, proporții mai mari (> 10%) fiind în general asociate cu un curs clinic mai blând. Concentrația hemoglobinei A2 este de obicei normală.,testarea solubilității bazată pe solubilitatea redusă a deoxi-HbS în prezența agenților reducători, de exemplu ditionitul de sodiu, are un rol limitat în diagnosticul bolii celulelor secera, deoarece nu diferențiază boala homozigotă și stările purtătoare. Într-o situație de urgență, un test pozitiv de solubilitate efectuat împreună cu o hemoglobină semnificativ redusă și o morfologie tipică a celulelor roșii indică puternic un diagnostic de boală a celulelor secera. Acest lucru trebuie confirmat prin analiza hemoglobinei cât mai curând posibil., Mai multe alte variante, inclusiv HBD, HbG și HB Lepore, au o mobilitate electroforetică identică cu cea a HbS pe acetat de celuloză, dar se pot distinge prin testul negativ de solubilitate în secera și electroforeza în gel de agar citrat la pH acid (6.0). Similar, hemoglobinele C, E și o, care co-migrează pe acetat de celuloză la pH alcalin, pot fi diferențiate prin electroforeză cu agar citrat. Ambele HbE și Hb Lepore sunt asociate cu thalassaemic de celule roșii indici, care în continuare sida lor distincție din electrophoretically variante similare., Focalizarea izoelectrică îmbunătățește rezoluția unor variante structurale și poate fi, de asemenea, utilizată pentru screeningul neonatal al eluatelor din cardurile Guthrie (dried blood spot), deoarece reduce interferența methemoglobinei prezente în astfel de probe.cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC) este o metodă rapidă și sensibilă de separare și cuantificare a hemoglobinelor care, în unele cazuri, permite identificarea unor variante imposibile prin alte tehnici., Deoarece este în mare măsură automatizată și necesită cantități minime de probă, HPLC a devenit metoda de alegere pentru testarea populației la scară largă, cum ar fi programele de screening neonatal. Screeningul Universal neonatal pentru boala celulelor secera a fost folosit în SUA și Anglia de ceva timp, iar programe similare sunt introduse în alte țări europene, din Orientul Mijlociu și din Africa, în funcție de prevalența condițiilor și a resurselor disponibile., Astfel de programe au avut ca rezultat beneficii semnificative în ceea ce privește mortalitatea și morbiditatea reduse datorită îngrijirii îmbunătățite, implementării timpurii a profilaxiei împotriva infecției pneumococice și educației parentale. În cazul β talasemiei, proporția hemoglobinelor individuale variază în funcție de genotipul subiacent. Talasemia β0 homozigotă este asociată cu predominanța HbF, absența HbA și cantități variabile de HbA2 (interval 1,0–6,0%, medie 1,7%). La persoanele cu β+ talasemie homozigotă sau compusul heterozigot β0 / β+ talasemie, este prezentă o cantitate variabilă de HbA., Hemoglobina F este crescută și distribuită eterogen între globulele roșii.
Precise de cuantificare a HbA2 prin HPLC sau microcoloana cromatografia este esențială pentru diagnosticul de β talasemie trăsătură, în care HbA2 este ridicat, de obicei > 3.5%., Transportatorii de ‘normal A2″ sau „silent’ β talasemie din cauza ușoară β gene defecte sau co-moștenirea de un δ mutație genetică în cis sau trans nu pot fi distinse cu ușurință de la α talasemie convențional prin metode de screening și necesită investigații de specialitate, tehnici, inclusiv in vitro globinei lanț de sinteza si analiza ADN-ului. Analiza globinei lanț sintetic raporturile de tritiated leucina încorporare și carboximetilceluloză cromatografia este definitivă modalitate de a identifica persoanele cu talasemie, deși este foarte rar folosit din cauza sale laborioase natura.,
α thalassaemias sunt caracterizate electrophoretically de prezența în mișcare rapidă variante, Hb Bart (γ4) și HbH (β4), care sunt cele mai evidente în neonatală probe. În hydrops fetalis, datorită homozigotă α0 talasemie, Hb Bart predomină și se găsește în cantități mai mici în alte α talasemie sindroame în perioada neonatală. Hemoglobina H poate fi, de asemenea, detectată prin colorare pentru organismele de includere HbH., Diagnosticul clinic silențios forme de α-talasemie este adesea unul de excludere, fiind realizat pe baza subiectului origine etnică, anemie microcitară hipocromă celule roșii indici și o normală sau scăzută HbA2 de concentrare, în prezența normală statutul de fier. Diagnosticul definitiv poate fi făcut prin analiza ADN, care poate distinge adesea α0 și α+ talasemie.,
în Timp ce majoritatea dintre hemoglobinopatii pot fi diagnosticate prin electroforeza hemoglobinei, variantele cauzate de substituții de aminoacizi care nu modifica taxa, cum ar fi cele găsite în unele instabil haemoglobins sau haemoglobins cu alterarea oxigen afinitate, se poate scăpa de detectare. Investigațiile suplimentare care pot fi utile în acest context includ evaluarea instabilității hemoglobinei și a afinității față de oxigen., Analiza ADN-ului de mare capacitate a făcut ca aceasta să fie o modalitate fezabilă de screening pentru mutațiile globinei în țările mai bogate, cu tehnici precum amplificarea sondei dependente de ligare multiplex, permițând identificarea mutațiilor genice mari, care anterior au fost detectabile numai folosind blotting sudic. Spectrometria de masă a hemoglobinei poate fi, de asemenea, utilizată pentru a identifica globinele anormale prin măsurarea exactă a masei acestora, cu o utilizare potențială deosebită în programele de screening care utilizează deja spectrometria de masă.,identificarea cuplurilor cu risc de hemoglobinopatii majore prin screening prenatal sau preconcepțional permite alegerea informată a reproducerii cu opțiunea diagnosticului prenatal. În cele mai multe cazuri, acest lucru se poate realiza acum în primul trimestru prin detectarea genelor globin mutante în ADN-ul vilos corionic. În mai multe țări, în special în Cipru, unde rata purtătorilor pentru β talasemia atinge 12%, Aceasta a dus la o scădere semnificativă a incidenței la naștere a tulburărilor de hemoglobină., Diagnosticul genetic preimplantațional este folosit din ce în ce mai mult pentru a permite selectarea embrionilor neafectați, deși continuă să fie un proces solicitant și costisitor, care nu este aplicabil majorității cuplurilor. Încercările continuă să dezvolte diagnosticul prenatal non-invaziv folosind celule fetale și ADN în sângele matern, deși acest lucru nu este în prezent fezabil din punct de vedere tehnic ca procedură de rutină pentru hemoglobinopatii.
