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추적 재조합 소 somatotropin ab(사용)을 통해 transcriptomics:의 잠재력을 소 체세포에서 다중량 종 study

의 효과 rbST 우유에 수익률

테이블의 2 요약을 보여줍의 산유량에 대한 rbST 및 제어 그룹으로 표현 평균과 표준편차의 우유 생산(Kg 하루에)에서 각각 처리 주기 뿐만 아니라 생산의 차이는 두 그룹(%여분의 우유에 의해 생산 rbST 그룹에서 비교하 제어 동물)., 에서 사이클 0 기 3,우유 생산을 증가하는 것을 보 두 그룹에서 가능성을 나타내는 동물이 있었 아직 도달하지 않 자신의 피크를 수유가 있습니다. 지만 첫 번째 용량의 rbST 투여 약 2 개월 산 후,권장하는 제조업체에 의해,그것은 중요하다고 이 추천서는 수학적 모델을 기반으로 하는 찾아 우유를 생산에서 피크 60-90 일의 산후., 그러나,이 모형은 이론적 접근과 우유에 일(DIM)에서 우유를 피크 다양한 변형이 가축과 소련되고,사이에 다른 요인에 의해 복지와 feeding37. 에서 4 주기의 끝으로 연구,감소에서 우유의 생산 제어 소 될 수 있는 보안 rbST 치료 동물 보였을 유지하는 그들의 상대적으로 생산 일정에 30-35kg 의 평균 우유,하루를 보여주는 명백한 감소하는 경향 때만 호르몬 치료 중지(주기 14,15,16)., 이 시점에서 그룹간에 관찰 된 생산 차이는 사이클 0 에서 관찰 된 것과 매우 가까운 수준으로 돌아 왔습니다. 그것은 놀라운 사실에는 우유를 생산에서 크게 높 rbST 그룹 이외에는 제어 전체 기간 동안 연구 동안을 제외하고,주기 6 때 이러한 동물 생산에만 5%이상 제어 과목(표 2). 에 기초의 격주로 관리 패턴의 rbST 권장하는 제조업체,하루에 70 그룹의 치료 동물이 있어야 받으신 새로운 복용량을 재조합의 성장 호르몬입니다., 그러나는 용량 적용되지 않았습할 수 있도록을 평가하는 경우 rbST 그룹을 수 있는 복구 전 용량 transcriptional 프로파일 28 일 후에 없는 호르몬 관리(Fig. 1). 가능성으로 인해 이 부족의 호르몬,통계적으로 유의한 차이에서 기존의 우유를 생산에 사는 두 그룹 사라지 효과를 강조 rbST 에 우유를 생산 속도(표 2). 84 일째에 rbST 를 다시 투여하고 두 그룹 간의 우유 생산의 유의 한 차이가 다시 나타났다(24%)., 는 최대의 차이 43%이상 우유 처리에서 동물과 존경을 제어하는 소가 관찰에 주기 12,모두 관련하여 유지되는 생산으로 인해 rbST 과 자연 감소하는 패턴을 제어들입니다. 신기하게도,이러한 중요한 차이점이 있었다가 끝날 때까지 유지된 학문의,심지어 거의 두달 마지막 투여 후(12 복용,일 168)관리되었다(표 2).

표 2 연구를 따라 처리 된(N=6)및 대조군(N=3)의 우유 수율.,

RNA isolation 소에서 체세포

MSCs 은 쉽게 수집하의 소스 RNA 유전자현 연구로서,이들 세포로부터 격리할 수 있습 원유 다음과 같은 매우 간단한 프로토콜입니다. 또한,샘플 컬렉션에는 저렴하고,비침범성 때문에 우유를 수집할 수 있습에서 젖을 방지 않고 직접적인 접촉으로 동물과 그러므로 스트레스를 주지 않고 그것을 변경할 수있는 결과를 얻습니다. 이 연구에서 rbST 치료는 유의 한 효과가 없었다(P=0.,099)는 MSCs 에서 분리 된 RNA 의 양으로,평균 농도는 rbst 그룹의 샘플에서 120.69±68.31μg mL−1 이고 대조군의 샘플에서 132.36±68.86μg mL−1 이다. 평균 A260/280 비 값은 1.766±0.095 였다. 스핀 컬럼을 갖는 정제 단계가 A260/280 비율 및 따라서 RNA 샘플의 순도를 증가시키는 것이 가능하다. 이 단계를 포함하면 일상적인 분석에서 샘플 가격이 증가하지만 순도가 높은 샘플을 얻을 수 있습니다. 분석 된 샘플에 대해 관찰 된 평균 RIN 값은 6.88±0 이었다.,82 몇몇 요인은 표본의 완전성에 영향을 미칠 수 있었습니다. 이 연구에 사용 된 샘플은 우유에서 분리 된 소 체세포였다. 우유는 복잡한 미생물 군집을 특징으로하며 그 미생물 군집에서 유래 된 RNases 는 더 낮은 RNA 무결성을 담당 할 수 있습니다. 또한,우유에 존재하는 체세포 중 일부는 부분적으로 분해 될 수 있습니다. 이러한 사실을 관찰되었 연구에 사용되는 소 질 얼룩한 transcriptomics 와 연구 목적을 찾아가 생체 추적 사용의 신진대사 agents38., 또한 착유,우유 수집 및 실험실으로의 운송 과정은 가능한 한 신속하게 수행 되더라도 RNA 무결성에 영향을 줄 수 있습니다.

somatotropic 축 유전자에 대한 rbST 의 효과

본 연구에 사용 된 OpenArray®플레이트를 설계하기 위해 18 개의 유전자 세트(표 1)가 선택되었습니다. 이 선택에 따라 이러한 잠재적인 유전자를 구하는 특성 rbST transcriptomic 서명할 수 있는 표준으로 사용을 제어하는 ab(사용)의 rbST 에서 낙농장 가축입니다., 이전의 유전자 발현 연구 rbST 도록 설계되었으로 하나의 복용량과 하나의 샘플링에서 연구는 사후 유 tissue27 또는 다중량(복용량이 다섯)와 연구 혈액하고 근육에서 샘플링 vivo31. 이러한 방법은 침습적 인 것으로 간주되며 상대적으로 비용이 많이 들기 때문에 낙농장에서의 통제 목적으로는 비실용적입니다. 의 경우에 somatotropin,제어 수행되어야에서의 생체 이후 궁극적인 목표지 항목의 rbST-우유로 낙농장이다.,

본 연구에서 IGF-1 의 발현은 rbST 로 처리 된 한 소(소 7)의 모든 샘플 점에서만 검출되었으며 대조군의 MSCs 에서는 검출 할 수 없었다. 다는 사실만을 감지하여 IGF-1 대에서 모든 샘플의 포인트 중 하나에 소가 나타낼 수 있습의 존재에 다른 로컬 유선 응답 exogenous rbST 개인들 사이에서. 가장 IGF-1 분자에서 찾을 순환하는 바인딩을 가진 높은 선호도가 하나 이상의 알려진 IGF-1 인 단백질(IGFBP-1–6)를 조절하는 생체 이용률에 IGF-1 의 대상 tissues39., 이전의 연구들은 rbST 가 cattle31 의 골격근에서 IGFBP-5 의 상향 조절에 강하게 영향을 미치고 유선 tissue32 에서 IGFBP-3 을 하향 조절한다는 것을 관찰했다. 그러나,본 연구에서,igfbp-3 도 IGFBP-5 의 성적표는 어느 시점에서도 검출되지 않았다. 이 결과는 MSCs 가 주로 IGFBP 의 억압 효과가 유선 조직에서와 같이 중요하지 않을 수있는 백혈구 40 으로 구성되기 때문일 수 있습니다. 따라서,igf-1 및 IGF-1 결합 단백질 모두 본 연구에서 체세포에서 잠재적 마커로서 폐기된다.,

또 다른 핵심 구성 요소의 somatotropic 축 IGF-1 수용체(IGF-1R)는 기본 신호 수용체 위해 IGF-1 는 중재 대부분의 생물학적 효과. 1 일째 rbST 군(0.348±0.131)은 대조군(0.0898±0.0486)보다 IGF-1R 의 상대 풍부도가 유의하게(P<0.001)높았다. 다른 연구는 평가의 농도 rbST 혈 관리 후 관찰하는 더 높은 농도의 재조합 호르몬 후에 발견 된 rbST administration14,15., 따라서,상당한 차이가 관찰에서 치료한 그룹으로 인해 수 있습에 대한 응답으로 IGF-1 으로 합성 반응이 더 높은 농도의 rbST 처리에서 소 후 첫 복용량을 관리합니다. 도에서. 2,그것을 관찰할 수 있는 상대의 풍부한 IGF-1 라운드에 대한 두 번째 사이클의 rbST 관리도에서 크게 높 rbST 그룹 이상 컨트롤에 그룹에 많은 샘플의 포인트입니다. 흥미롭게도,연구 84 일째 IGF-1r 의 상대적 풍부도는 rbST 군(0.070±0.057)과 대조군(0.110±0.030)에서 유사했다., 이 날은 rbST 의 여섯 번째 투여와 일치했으며,이 용량과 다섯 번째 용량 사이에는 14 일 대신 28 일의 간격이있었습니다. 따라서,그것은 가능한 rbST 그룹 복구의 생리학적 수준의 IGF-1R 후 며칠 동안이나 rbST,보여주는 탈퇴 효과의 다운 규제에 IGF-1 라운드 녹음. 이러한 결과는 igf-1R 이 낙농장에서 rbST 의 사용을 검출하기 위해 유전자 패널에 포함시키기에 가능한 좋은 후보임을 나타낸다., 지만 다른 저자를 찾지 못했의 중요한 효과 rbST 에 IGF-1R 수준에서 골격 muscle31,이 연구에서 명확한 반응이 관찰되었 수준에서 이 수용체의 성적증명서에 MSCs. 이러한 의미에서,백혈구,호 중구,단핵구할 수 있는 성장 호르몬을 생산하고 IGF-1 과 그들의 수용체를 나타내는 IGF-1/IGF-1R 신호 경로도 발휘하는 규제 기능에 대한 면역 시스템을 포함한 면역세포 proliferation41,42. 두 연구의 차이는 사용 된 다른 행렬 때문일 수 있습니다., MSCs 수 있는 가능하게 더 잘 반응하는 더 높은 수준의 순환 IGF-1 의 수를 증가시킬 수용체 이에 대한 분자들의 막

림 2

상대적인 풍요의 IGF-1R 및 CCND-1 에 첫 번째와 두 번째 사이클의 rbST 관리에 있어 그룹(N=3)및 처리 그룹(N=6). 비모수 Mann–Whitney U 시험은 처리 된 그룹과 대조군 사이의 각 사이클에서 우유 수율을 비교하는 데 사용되었습니다., 별표는 처리 된 그룹과 두 대조군간에 통계적으로 유의미한 차이를 나타냅니다. *(p<0.05),**(p<0.01),***(p<0.001).

의 효과 rbST 에 대한 면역 시스템과 관련된 유전자

종양 necrosis factor(TNF)및 interleukin-1β(IL-1β)두 cytokines 밀접하게 관련된 면역 system43., 아마도 그들의 관계로 인해,연구 전반에 걸쳐 tnf 와 IL-1β 성적표의 상대적 풍부도에서 유사한 경향을 확인하는 것이 가능했다. RbST 투여는 TNF 및 IL-1β 성적서의 상대적 풍부도의 유의 한 증가를 유발했다. 9 일,23 일 및 35 일에 tnf 와 IL-1β 의 상대적 풍부도가 대조군과 비교하여 rbST 군에서 유의하게 높았다는 것을 언급 할 가치가있다(도 1b). 3). 이 날은 Lactotropina®주사 후 약 7-9 일 rbST 주기의 두 번째 주에 해당합니다., 따라서,이 두 사이토 카인에서 rbST 에 의한 전사 변화가 rbST 사이클의 두 번째 주에 더 분명해질 가능성이있다. 흥미롭게도,84 일째(제 5 회 rbST 투여 후 28 일)에 그룹간에 유의 한 차이가 없었다(그림 1). 3). 이러한 맥락에서,이전의 다른 연구들은 cattle26,38 에서 단백 동화 작용제의 사용을 탐지하기 위해 강력한 transcriptomic 기술을 사용했다., 이러한 연구는 또한 증가는 전사 IL-1β,그들 중 하나 significantly26,그리고 이것은 매우 흥미로운 일이기 때문에라고 연구하는 데 사용혈구는 구성은의 그것과 매우 유사하 MSCs 으로,그들은 높은 비율의 백혈. 그러나,이전에 언급한 연구를 찾지 못했는 효과의 신진대사에 에이전트 TNF,는 현재 연구 발견의 강한 영향을 미친 rbST 관리에 상대적으로 TNF., 이와 관련하여,수유 중 rbST 의 외인성 투여는 cows44 에서 면역 반응을 향상시킬 수 있다고보고되었다. 실제로,우유 체세포 수는 rbST 가 투여되었을 때 coliforme 유방염으로 고통받는 젖소에서 더 일찍 그리고 더 빨리 증가했습니다 45. 성장 호르몬 및 재조합 버전을 표시하는 기능을 조절한 염증 반응과 호 방어의 소 젖을 주는 유선에서 건강과 질병 cows45. 이것은 rbST 처리 된 젖소에서 TNF 와 IL-1β 의 상향 조절을 설명 할 수있다.,

transcriptomics 를 사용하여 선별 연구에서 매우 믿을만한 유전자로 사용될 수있는 특정 유전자를 찾는 것은 매우 어렵습니다. Il-1β 와 TNF 는 모두 하위 임상 유방염 46,47 과 같은 다른 과정에서 상향 조절 될 수 있음을 주목해야한다. 다른 연구에서 실시된 미국을 관찰하는 대규모 농장이 더 높을 채택하 rbST 제안하지만 잠재적인 농장 크기 구성 요소의 rbST 사용 및 수익성도 있는 연산자(연령 및 교육)component48,49., 재조합 somatotropin 되었습을 자주 보고 관리자로서의 집약적인 기술,사용과 관련된 다른 생산성을 중심 기술 및 관리 방법의 특성인 큰 농장,는 덜 자주 사이에 grazers49,50. 이러한 의미에서,subclinical 유방염은 영향을받는 cows51 에서 우유 생산 감소를 유발합니다. 따라서 transcriptomic assays 의 데이터를 우유 생산 데이터와 결합하는 것이 흥미로워 야합니다., 또한 그것을 동반 할 수있는 우유 미생물 분석 결과가 의심되는 소을 감지 주요 병원균 관련된 무증상선염. 그러나 차별의 가능성을 실제로 증가시키는 것은 패널에 더 많은 유전자를 포함시키는 것입니다.

의 효과 rbST 에서 세포주기,확산,차별화 및 접착

그것은 알고 있는 rbST 증가 우유 합성이 증가하여 매출(확산/apoptosis)및 활동의 유 방 상피세포,을 나타내는 rbST 영향에 대사 경로를 통제하는 세포의 매출/사이클 및 metabolism52., 세포주기는 사이클린 및 사이클린 의존성 키나아제에 의해 제어된다. 의 사람들,cyclin D(endoded 에 의해 CCND1 유전자)좌표를 세포주기 진행을 통해 세포외 자극을(예를 들어,성장율,영양소의 가용성)및 드라이브 G1S 단계를 진행 결과에서 세포 유사분열. 그러나,대부분의 성인 세포에서 유지보수 무부하 상태로 알려진 G0 단계에서,휴식 상태,그리고 그들은 다시 입력 할 수 있습니다 세포주기에 G1 단계에서 적절한 mitogenic stimuli53. 이 연구에서 rbST 치료가 CCND1 전사에 강하게 영향을 미친다는 것이 관찰되었다., RbST 의 첫 번째 투여 전에 대조군과 rbST 군간에 유의 한 차이는 없었다(그림 1). 3). 그러나,첫 번째 투여 후,상이한 샘플 시점에서 두 그룹간에 유의 한 차이를 관찰 할 수 있었다. CCND1 의 상대적 풍부도는 rbST 치료의 두 첫 번째 사이클에서 대조군보다 rbST 군에서 유의하게 높았다(도 1). 2). 이 효과는 TNF 및 IL-1β 성적표와 유사하게 rbst 투여 후 9 일 후에 특히 분명해 보인다., 따라서,연구의 9 일,23 일 및 35 일에 CCND1 의 상대적 풍부도는 대조군보다 RBST 군에서 유의하게 높았다(도 1). 3). 마지막으로,84 일째(제 5 회 rbST 투여 후 28 일)에 그룹간에 유의 한 차이가 없었다(도 1). 3)사이토 카인의 경우와 마찬가지로. 또한,마지막 날에(219)의 샘플링(51 일 후에 마지막 rbST 량),상당한 차이가 있었다(P>0.05)사 rbST 그룹(0.433±0.141)어 그룹(0.430 에±0.178)., 따라서 rbST 의 외인성 투여는 CCND1 의 과발현을 일으킨다. 이 발생할 수 있습에서의 활성화 셀 G0 단계에서는 특정 사례의 유방 조직을,우유 생산에 있는 증가를 통해의 수를 증가하 폐포세포의 유 gland54.

세포주기와 관련된 다른 유전자는 종양 단백질 D52 유사 2(TPD52L2)및 sirtuin2(SIRT2)입니다. 와 유사한 방식으로 관찰해 CCND1,TNF and IL-1β,그것을 찾을 수 있었다 상당히 높은(P<0.001)에 상대적인 풍요의 SIRT2 성적 증명서에 rbST group(1.,연구 23 일째에 대조군(0.506±0.250)보다 517±0.199),그러나이 경우에는 rbST 투여의 두 번째주기(도 1)에 불과하다. 4). 의 증가 수준 CCND1 및 SIRT2 성적 후에는 두 번째의 관리 Lactotropina®에서 치료한 그룹의 결과 될 수 있는 효과 외인 rbST 에서 세포주기입니다. 유기체에 있는 이 펩티드 호르몬의 순환은 표적 세포에 있는 세포 주기의 활성화 귀착될 것입니다., 그러나,다른 rbST 주기 사이의 관계를 복용량 관리와 변경에서 상대의 풍부한 SIRT2 성적 증명되지 않았으로,두번째 용량이다. 앞서 언급한 내용 외에도,그것은 놀라운 것은 처리 그룹을 제시 상당히 높은 상대적인 풍요의 TPD52L2 성적 증명서(P<0.05)는 동안 4 일 후 첫 번째 rbST 관리합니다. 번역에서 관련 역할에 의해 세포 대사에 연루된 또 다른 성분은 진핵 생물 신장 인자 1 감마(EEF1G)이다.,

림 4

진화의 상대적인 풍요의 일부 대상 유전자하는 동안 모든 샘플의 포인트에서 연구 rbST 처리 그룹(N=6)and control group(N=3).

이 연구에서는 상대적인 풍요의 EEF1G 성적 증명서 따르지 않았다는 명백한 경향이 관련 rbST 관리합니다., 그러나 17 일과 30 일(각각 두 번째 및 세 번째 rbST 투여 후 3 일과 2 일)에 EEF1G 성적서의 상대적 풍부도는 rbST 군에서 유의하게 높았다. 이전 study27 결론을 내렸다 rbST 치료를 증가시킨 수준의 EEF1G 성적 증명서에는 유방 조직을 그만 사용되는 하나의 샘플점 6 일 후 somatotropin 관리합니다. 따라서,그것을 가능하지 않은 직접 비교하고 그 결과로 얻어진 결과 이 연구에서는 36 샘플의 포인트 사용되었 transcriptomic 분석을 통해 코스 8 개월입니다., 이 연구에 포함 된 또 다른 유전자는 우유 지방 소구-EGF factor8protein(MFGE8)입니다. 도에서. 도 4 를 참조하면,rbST 그룹에서 mfge8 의 상대적 풍부도가 샘플링 일 사이에 큰 변동성을 가졌음을 관찰 할 수있다. 특히,McCoard et al.27 은 rbST 투여 후 6 일 후에 소 유방 조직에서 mfge8 의 상대적 풍부도가 더 높다는 것을 관찰했다. 그러나 앞서 언급했듯이,그 연구에는 단일 rbST 투여 후 하나의 데이터 포인트 만 포함되었습니다., 현재 장기간 다량을 실험을 보여 주었는 전사 패턴에 소 동물 처리 rbST 큰 변화다. 예를 들어,데이터 획득을 위한 CCND1 보이는 효과 rbST 에서 녹음의 일부 유전자가 증가와 숫자의 복용합니다. RbST 가 MFGE8 유전자의 전사에 영향을 미칠 가능성이 있지만,얻어진 결과는 상향 및 하향 조절을 모두 나타냈다., 따라서,MFGE8 할 수 없으로 제안하는 이상적인 후보자에 대한 추적 rbST(ab)에서 사용 가축으로,그것을 가능하지 않았을 관찰하는 명확한 경향에서 전사. 이 연구에서 평가 된 세포 순응도와 관련된 또 다른 유전자는 catenin alpha-like1(CTNNAL1)입니다. 그러나,rbST 투여의 결과로서 그것의 전사에서 유의 한 차이를 발견하는 것은 가능하지 않았다.

기타 유전자

락토페린(LTF)은 트랜스페린 패밀리에 속하는 철 결합 당 단백질이다 55., 그림 4 는 본 연구에서 평가 된 모든 샘플 지점에서 ltf 유전자 상대 풍부도의 진화를 보여줍니다. 지만 의 공인 인증에서 관찰되었전 연구와 신진대사 물질에 cattle38,그것을 가능하지 않았을 설정하는 명확한 경향에 대한 공인 인증과 관련하여 rbST 치료입니다. 예를 들어,9 일 및 53 일에,rbST 처리 된 동물에서 ltf 의 상대적 풍부도가 상당히 낮았다. 그러나 91 일째에는 상대적 풍요 로움이 그 그룹에서 상당히 높았다. 콜라겐 iii 형 α1(COL3A1)유전자에 대해 얻은 결과를 논의 할 필요가있다., 이전의 연구 결론을 내렸다 트리트먼트 rbST 에서 젖소의 원인 upregulation 의 COL3A1 유전자에서 유방 조직을 6 일 후 rbST administration27. 그러나,현재의 작업에서 COL3A1 유전자의 성적표를 검출하는 것은 가능하지 않았다. 또한 ESR2 전사는 본 연구에서 검출되지 않았다.

패널의 유전자를 모니터링 rbST(ab)에서 사용 유제품 소

최종 목표는 이 작품의 제안하는 일상적인 위원회의 유전자의 결합 패턴 전사 개발을 수 있습니의 심사 방법을 제어하는 잘못 사용 rbST 에서 낙농장을 통해 MSCs., 과 달리 다른 이전 studies27,31,32,이 작품은 분석 패턴 전사의 rbST 관련 유전자에서 8 개월의 실제 조건을 실험을 포함하여 12 주기의 rbST 관리 및 제어 동물입니다. 이 접근법은 rbST 처리 젖소와 대조 젖소를 구별하기 위해보다 정확한 데이터를 얻을 수있었습니다.

다변량 통계 분석은 Rbst 투여의 결과로서 MSCs 전사 패턴에서 수정을 명료화하기 위해 실행되었다., 이를 위해,성적 증명서의 유전자는 성공적으로 측정한 전체적인 실험(IGF1R,CCND1,TNF,IL1ß,SIRT2,EEFG1,MFEG8,공인 인증,TDP52L2)는 데 사용되었을 제외한 그 유전자에만 표현이 매우 몇 가지 경우/샘플입니다. 의 주요 목표는 PCA 분석을 식별하는 글로벌 패턴에 데이터를 검출하는 사이의 상관 관계를 다른 변수,즉 이 특정한 경우,편곡의 다른 유전자입니다., 투 샘플의 새로운 다차원 공간의 주요 구성 요소(Pc)에게 잠재적으로 허용 사이의 차별화 rbST 및 제어 그룹을 강조한 이들 유전자는 능력이 향상으로 바이오 마커의 치료입니다. 도 1 에 도시 된 PCA 분석의 스코어 플롯에서. 5,그룹화하는 경향이 될 수 있습을 엿볼 두 그룹의 MSC 샘플 rbST 치료 동물 식별로 붉은 서클 및 제어 동물들로 상자 분류에 따른 실험적인 일., 다양한 샘플의 rbST 그룹의 등장과 혼합된 제어의 왼쪽에 있는 플롯하지만,충분히 흥미롭게,그들의 대부분에 대응하는 일의 somatotropin 관리(일 14,28,57,84)또는 첫 2~3 일 후 복용량(일 2,3,17,44 또는 115),에는 분명 transcriptomic 장애 감지되지 않은 것입니다. 반대로,매우 몇 가지 제어 동물로 분류될 수 있었습니다 처리에 소 PCA 고,자신의 상황을 설명하여 극단적인 값에 특히 저조한 차별적 취급,구속조건부 유전자와 같은 공인 인증,MFGE8 또는 SIRT2.,

그림 5

PCA 플롯에 건설을 사용하여 전체 transcriptomic 프로파일 우유의 체세포(Msc),에서는 차별 사 치료를 소 rbST(N=6,적색)및 제어 동물(N=3;검은색 상자) 을 엿볼 수있다. MSC 샘플은 처리 된 동물에서 첫 번째 rbST 용량의 날 0 인 실험 일에 따라 라벨링됩니다.,

transcriptomic 프로필 또한 받을 OPLS-DA,에서는 잠재적 차별적 취급,구속조건부 유전자가 지적했다. 도에서. 6a,시각적 표현의 다변수 모델은 다음과 같,MSC 에서 샘플을 제어 동물로 그려진 까만 사각형 및 샘플 rbST 그룹으로 빨간색니다. PCA 와 유사한 방식으로,타원의 왼쪽에있는 대조군 샘플들 사이에 여러 개의 rbST 샘플이 투영된다., 그러나,이러한 샘플 수집되었을 때 transcriptomic 장해에 의해 발생 rbST 사라졌(또는 그 나타나지 않는 아직),그래서 엄격하게,그들이 할 수 있으로 분류되트에서는 특정 순간입니다. 반대로,rbst 로 잘못 분류 된 대조군 샘플은 거의 없었다. 이 경우와 같이 테스트 세트를 사용할 수없는 경우 교차 검증 방법이 모델의 품질을 평가하는 주요 전략입니다. 교차 검증 절차의 결과는 다른 품질 매개 변수의 값으로 요약됩니다., 이 연구에서 OPLS 다변량 모델은 다음과 같은 특성을 나타냈다:R2(X)=0.6,R2(Y)=0.4 및 Q2=0.3. 이 모델은 x-공간의 변화의 60%와 y-공간의 변화의 40%를 설명하며 예측의 선량은 30%입니다. 이 값은 모델 및 평균 predictability34 에 의한 데이터의 비교적 좋은 설명을 나타냅니다. CV-ANOVA 로부터 계산 된 p-값은 3.01×10-7 이었고,모델의 두 클래스 사이에 유의 한 차이가 있음을 시사한다., 는 사실이 이 모델을 제작했으로판의 유전자를 가진 다른 차별 능력을 무시할 수 없습니다,그것이 영향을 미치는 차별 전원의 OPLS. 게다가,그들의 실험 일와 매우 거의 또는 전혀 rbST-에 영향을 자신의 성적 증명서는 바이어싱 모델에서부터 연습 중 하나에 속하는 그룹만으로 행동합니다., 미래에는 다변량 검열 모델,패널의 선택이 높은 차별적 취급,구속조건부 유전자가 사용해야 하며,바람직하게는 알려진”””unknown”샘플을 것으로 예상된 다변량 모형에 속하는 것입 비슷한 집단(나이,유형,etc.)및 수유 순간,개인 간 동물 다양성을 극복하기위한 시도 35. 이러한 종류의 접근법에서 예측 인구가 예측 된 샘플보다 큰 것도 중요합니다. 마지막으로,OPLS-DA 에 대한 차별의 이유는 해당 S-플롯에서 조사되었다(그림 1)., 6b),이는 두 샘플 클래스의 분리에 대한 각 변수(유전자 전사)의 기여를 밝혀냈다. 이전 섹션에서 언급했듯이 MSC 에서 가장 차별적 인 전사는 CCND1,IGF-1R,TNF 및 IL-1β 유전자에서 발견되었습니다. 그것은 나타나는 rbST 트리트먼트 트리거 upregulation 그 유전자 및 그들의 usein 미래를 모니터링 위원회는 유망한 옵션에 대한 일상적인 통제에 낙농장이다.,

그림 6

OPLS-DA scatter plot(a)사용하여 건설 trasncriptomic 프로파일을 우유에서 체세포,보여주는 차별이어(N=3;검은 원)및 rbST(N=6;red dots),동물 분류에 따른 실험적인 일(되는 날 0 는 날의 1 일 복용량에서 rbST 그룹). S-플롯(b)에 관련된 OPLS 판별 분석을 강조,유전자에 의해 영향을 받 rbST 에서 오른쪽 상단의 줄거리고,따라서 더 높은 차별적 힘입니다.,

에서와 같이 일상적인 제어를 감지하는 불법적 사용의 rbST 이 유전자를 가진 패널이 없는 경우에 대한 정보를 암소로 처리되었습니다(다른 사람에 단어를,그것 맹인 분석 결과),이 모든 날 동안 수유해야 샘플링/제어됩니다. 그러나 실용적인 관점에서이 제안은 조금 비현실적으로 들립니다. 그것이 제안 된 것은 일주일에 한 번,주 일을 번갈아 가며 우유를 무작위로 모으는 것입니다., 로몬 투여 정기적으로 수유(80~100 일을 시작 산후,bi-weekly),에서 모든 수유 젖소의 농장과 함께,좋은 샘플링 계획에서 어떤 시점 rbST 해야에서 감지된 농장입니다. 수집 된 샘플에서 얻은 transcriptomic 데이터는 대조군 모집단의 transcriptomic 데이터 세트와 비교되어야합니다. 이 논문에서 제안 된 유전자의 더 높은 값을 제시 한 샘플은 의심스러운 것으로 간주되어야한다. 두 번째 단계는 각”긍정적 인”젖소(유방염,임신 등)의 특정 상황을 조사해야합니다.,필요한 경우 확인 분석을 계속하십시오. 이 실시간 PCR 접근 방식의 높은 처리량 용량 또한 강조하는 것이 중요하다,실현 가능한 샘플링 계획을.피>

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