그것은 진정한 노력을 유지하는 기본적인 지식의 분자 및 세포생물학,신선한에 더하여 다른 모든 당신이해야 할 것입니다. 몇 분만에 그 기본 사항을 브러시 업 할 수있는 읽기 쉬운 기사를 찾을 수있는 곳이 있다면 좋지 않을까요?
…나는 당신이 말했다”그렇기 때문에,”이는 목표의”기본 사항:”시리즈의 기사를 우리는 이미,그리고 계속,당신에게 가져다 주기적으로. 이 기사에서는 DNA 결찰의 기본 사항을 설명합니다.,dna 결찰 버디:DNA 리가 제
DNA 리가 제(EC6.5.1.1)는 DNA 결찰 반응의 중심에있는 효소입니다. 그것을 공유 조인산염의 중추 DNA 와 무뚝뚝한 또는 호환 가능력 끝납니다(그림 1 참조)와 그것의 자연적인 역할을에서는 수리 double strand breaks 에서 DNA 를 분자. 분자 생물학에서는 제한 효소 생성 DNA 단편을 벡터 백본으로 삽입하는 데 일반적으로 사용됩니다. 상업용 리가 제는 atp 및 mg2+를 함유하는 반응 완충액으로 공급되며,이는 모두 리가 제 활성에 필수적이다., ATP 는 반복적 인 동결-해동 사이클에 의해 손상 될 수 있기 때문에 완충액을 만드는 것이 좋습니다(내 기사”5DNA 결찰 팁”참조).
그림 1. 응집력 있고 뭉툭한 끝,DNA 결찰 준비!
DNA 결찰 반응의 두 단계
DNA 결찰 반응 자체는 두 가지 기본 단계를 갖는다. 첫째로 DNA 끝은 우연히 충돌하고 ligase 가 그(것)들을 결합하기 위하여 충분히 오래 함께 체재해야한다. 이것은 반응에서 가장 비효율적 인 부분이지만 저온에서는 더 쉽습니다. 왜?, 글로,당신은 아마도 모든 분자 이동을 빠르게 높은 온도에서 상상할 수 있도록 그것은 쉽게 될 것 두 DNA 을 충돌과 함께 숙박하는 경우 그들은 부 솔루션을 통해 낮은 온도보다 지나가게 대대로 그들은 더 높은 온도에서. 을 위한 응집력이 끝나면 거기에 추가적인 이유로 낮은 온도 안정화 수소 사이의 결합은 상호 보완적인 뉴클레오티드는 일을 유지하는 데 도움이다.
그림 2., DNA 결찰의 효소 반응
두 번째 단계는 효소 반응이며,도 2 에 개략적으로 도시되어있다.. DNA 리가 제는 2 단계 메커니즘을 통해 3′-OH 를 5′-인산염에 결합시키는 것을 촉매한다. 먼저,효소의 활성 부위에서 라이신 잔기에 부착 된 AMP 뉴클레오타이드는 5′-인산염으로 변형된다. 그런 다음 AMP-인산염 결합은 3′-OH 에 의해 공격되어 공유 결합을 형성하고 AMP 를 방출합니다. 효소가 추가 반응을 수행 할 수있게하려면 효소의 활성 부위에있는 앰프가 ATP 에 의해 보충되어야합니다.,
여기에 왜 우리가 수행 DNA 를 내고는 낮은 온도에서 도울 수 있
DNA 리가 효소는 최적의 활동에서 25°C 므로 결찰 반응은 온도에서 수행되는 무역 사이에 최적의 온도를 데리고 DNA 에 함께 종료(1°C)및 효소 반응(25°C). 일반적으로 1 시간에서 16°C 까지 때문에 데리고 DNA 의 끝을 함께은 적어도 효율적인 부분의 반응을 선호하는 이로 온도를 낮추고 4°C 을 줄 수 있는 더 효율입니다. 그러나 효소는이 온도에서 매우 천천히 작동하므로 오래(예:, 하룻밤)배양 시간이 필요합니다.
원래 2007 년 10 월 31 일에 게시;2014 년 12 월 5 일에 업데이트되고 다시 게시되었습니다.이것이 도움이 되었는가? 그런 다음 네트워크와 공유하십시오.
