토론
그람 염색의 가장 널리 사용되는 염색한 절차에 세균학. 그람 양성균과 그람 음성균을 구별하기 때문에 차등 얼룩이라고합니다. 그람 염색 절차로 보라색을 얼룩지게하는 박테리아는 그람 양성이라고합니다;분홍색을 얼룩지게하는 것들은 그람 음성이라고합니다. 약관에 긍정과 부정 할 수 없으로 전기료,단순히 지정한 두 가지 형태 그룹의 박테리아.,
그람 양성균과 그람 음성균은 세포벽 구조의 근본적인 차이 때문에 다르게 얼룩지게됩니다. 박테리아 세포벽은 유기체에 크기와 모양을 부여 할뿐만 아니라 삼투압 용해를 방지하는 역할을합니다. 강성을 부여하는 박테리아 세포벽의 물질은 펩티도 글리 칸입니다.
전자 현미경에서는,Gram-positive cell 벽으로 나타납니다 넓은 밀도 벽 20-80nm 두꺼운로 구성된 수많은 상호 연결층의 peptidoglycan(숫자 1A and1B). 화학적으로 그람 양성 세포벽의 60~90%가 펩티도 글리 칸입니다., 그람 양성의 세포벽에 짜여진 것은 테이 코산입니다. 세포벽의 나머지 부분을 통해 그리고 그 이상으로 확장되는 테이 초산은 글리세롤,인산염 및 당 알코올 리비 톨의 중합체로 구성됩니다. 일부에는 지질(리포 테 이코 산)이 붙어 있습니다. 펩티도 글리 칸의 외부 표면에는 박테리아의 균주 및 종과 다른 단백질이 박혀있다.,
그램 음성 세포벽,다른 한편으로는,포함되어만 2~3 층의 peptidoglycan 으로 둘러싸여 외부 막으로 구성질,lipopolysaccharide,지단백질 및 단백질(그림 2A and2B). 그람 음성 세포벽의 10%-20%만이 펩티도 글리 칸입니다. 인지질은 주로 외막의 내부 층에 위치하며,외막을 펩티도 글리 칸에 연결하는 지단백질이다., 이 lipopolysaccharides,에 위치하고 있는 외부 계층의 외부 멤브레인으로 구성됩 지질 부분이라는 지질에 포함된 멤브레인 및 다당류의 부분 확장에서 바깥쪽으로 항균 표면입니다. 외막은 또한 박테리아의 균주 및 종과 다른 다수의 단백질을 함유한다.,
에 대한 자세한 내용은 그램 음성과 그램 양성 세포벽,다음과 같은 학습 객체에서 강의 가이드:
- 의 원핵 세포벽,단위 1,절 IIB2
- 는 그램 양성 세포벽,단위 1,절 IIB2a
- 그램 음 셀 벽;1, 섹션 IIB2b
그 염색 절차를 포함한 기본적인 네 단계가:
1. 박테리아는 먼저 기본 염료 크리스탈 바이올렛으로 염색됩니다. 그람 양성균과 그람 음성균은 모두 직접 염색되어이 단계 후에 자주색으로 나타납니다., 피>2. 그런 다음 박테리아는 그램의 요오드 용액으로 처리됩니다. 이것은 불용성 결정 바이올렛-요오드 복합체를 형성함으로써 얼룩을 더 잘 유지할 수있게한다. 그람 양성균과 그람 음성균은 모두이 단계 후에 자주색으로 유지됩니다. 피>3. 그런 다음 에틸 알코올과 아세톤의 혼합물 인 그램의 탈색제가 첨가됩니다. 이것은 차동 단계입니다. 그람 양성균은 그람 음성균이 탈색되는 동안 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체를 유지합니다. 피>4. 마지막으로,카운터 스테인 사 프라 닌(또한 염기성 염료)이 적용됩니다., 그람 양성균은 이미 자주색으로 염색되어 있기 때문에 카운터 스테인의 영향을받지 않습니다. 현재 무색 인 그람 음성 박테리아는 th e safranin 에 의해 직접 염색됩니다. 따라서 그람 양성은 보라색으로 나타나고 그람 음성은 분홍색으로 나타납니다.
©Daniel Cavanaugh,Mark Keen,저자,사용 허가,ASM MicrobeLibrary.,
현재 이론의 뒤에 그람 염색,그것은 생각에는 그램 양성 박테리아,크리스탈 바이올렛 요오드화물 결합하여 더 큰 분자 침전 셀 내에 있도록 하십시오. 알코올/아세톤 혼합물이 그 원인의 탈수층 peptidoglycan,따라서 감소 사이의 공간은 분자 및 세포벽을 트랩 크리스탈 바이올렛 복잡한 요오드 셀 내에 있도록 하십시오., 의 경우에는 그램 음성 박테리아,알코올/아세톤 혼합되고,지질 용제,용해 외부 멤브레인의 세포벽을 수도 있습 손상 세포질 막는 peptidoglycan 가 부착되어 있습니다. 펩티도 글리 칸의 몇 층은 결정 바이올렛-요오드 복합체를 유지할 수 없으며 세포는 탈색된다.
하는 것이 중요하고는 그램 양성(을 유지하는 능력이 보라색 크리스탈 바이올렛 복잡한 요오드화물)는 전도 현상이지만,문제의 정도입니다., 그람 양성 유기체가 그람 음성으로 염색 될 수있는 몇 가지 요인이 있습니다:
1. 사용 된 방법 및 기술. 과열하는 동안 열정 이상,탈색,알코올로도 너무 많은 세척과 물 사이에 단계에서 발생할 수 있습 그램 양성 박테리아를 잃고 크리스탈 바이올렛 요오드 복잡합니다. 피>2. 문화의 시대. 24 시간 이상 된 문화는 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체를 유지하는 능력을 잃을 수 있습니다. 피>3. 유기체 자체., 일부 그람 양성균은 다른 것보다 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체를 유지할 수 있습니다.
따라서 그램 염색에 매우 정확한 기술을 사용하고 재량으로 결과를 해석해야합니다.
Trypticase 콩 agar 판의 문화 대장균(작은,그램 음성균)과 황색포도상구균 epidermidis(그램 양성 coccus 으로 황색 포도상구균을 배열).
절차(개별적으로 수행)
1., 대장균
니다. 열정의 얼룩 대장균 다음과 같다:
1. 를 사용하여 적기에병의 이온을 제거된 물을 발견에서 염색 선반,장소의 1/2 이상 크기의 드롭 다운 물에 깨끗한 슬라이드 터치하여 적기에 슬라이드(그림 1). Altenately,슬라이드에 탈이온 물 한 방울을 배치하기 위해 멸균 접종 루프를 사용합니다. 피>2., 를 사용하여 멸균 루프 접종,무균으로 제거하는 소량의 문화에서 한 표면을 부드럽게 그것은 2-3 번의 드롭 다운 물을 때까지 물가 눈에 띄게 흐리고(그림 2). 올바른 양의 박테리아가있는 좋은 얼룩은 그램 염색에 필수적입니다.
- 활주에 너무 많은 박테리아는 밑에 탈색 귀착될 수 있었습니다;너무 몇몇은 과다 탈색으로 이끌어 낼 수 있었습니다.
3. 접종 루프에 남아있는 박테리아를 소각하십시오., 너무 많은 문화는 추가 물 표시 되지 않습니다 얼룩진 개인 박테리아 및 가입하지 않았을 수 있습니다 믿을 수 있는 그램 얼룩합니다. 피>4. 접종 루프가 냉각 된 후,현탁액을 슬라이드의 약 절반에 걸쳐 펼쳐 박막을 형성하십시오. 올바른 양의 박테리아로 올바르게 준비된 스미어는 그림과 비슷해야합니다. 3. 피>5. 이 얇은 서스펜션이 완전히 공기 건조되도록하십시오(그림 4). 슬라이드가 열 고정되기 전에 스미어가 완전히 건조되어야합니다!피>6., 열정 박테리아의 슬라이드,선택 건 슬라이드와 coverslip 집게 길게 슬라이드 아래쪽 반대편으로 얼룩 근처의 열 microincinerator10 초 동안(그림 5)입증에 의해 강사입니다. 슬라이드가 충분히 가열되지 않으면 박테리아가 모두 씻겨 나옵니다. 그것이 과열되는 경우에,박테리아 구조상 완전성은 손상될 수 있습니다.
b.허커의 크리스탈 바이올렛으로 1 분 동안 얼룩지게하십시오(그림 6). 물(그림 7)로 부드럽게 씻으십시오. 과량의 물을 떨쳐 버리십시오 그러나 단계 사이에서 건조하게 물지 마십시오. 피>기음., 1 분 동안 그램의 요오드 용액으로 얼룩을 묻히고(그림 8)물기를 부드럽게 씻으십시오.
d. Decolorize 선택하여 슬라이드를 마시며 그램의 decolorizer 행 슬라이드까지라 그냥 중지에서 흐르는 바닥의 슬라이드(그림 9).
- 전체 스미어가 고르게 탈색되었는지 확인하고 언더 탈색 또는 오버 탈색되지 않았는지 확인하십시오.리>물 즉시 세척.
e.1 분 동안 safranin 으로 얼룩을지게하십시오(그림 10)., 과량의 사프라닌을 씻어 낼 때 세균의 사르 파닌 중 일부를 씻어 낼 수 있으므로 부드럽고 짧게 씻는 데 매우주의하십시오.
f.오점 건조(그림 11)및 오일 침지 현미경을 사용하여 관찰하십시오.
2. 황색포도상구균 epidermidis
니다. 열정의 얼룩 황색포도상구균 epidermidis 다음과 같다:
1. 를 사용하여 적기에병의 이온을 제거된 물을 발견에서 염색 선반,장소의 1/2 이상 크기의 드롭 다운 물에 깨끗한 슬라이드 터치하여 적기에 슬라이드(그림 1)., Altenately,슬라이드에 탈이온 물 한 방울을 배치하기 위해 멸균 접종 루프를 사용합니다. 피>2. 를 사용하여 멸균 루프 접종,무균으로 제거하는 소량의 문화에서 한 표면을 부드럽게 그것은 2-3 번의 드롭 다운 물을 때까지 물가 눈에 띄게 흐리고(그림 2).
- 활주에 너무 많은 박테리아는 밑에 탈색 귀착될 수 있었습니다;너무 몇몇은 과다 탈색으로 이끌어 낼 수 있었습니다.
3. 접종 루프에 남아있는 박테리아를 소각하십시오., 너무 많은 문화는 추가 물 표시 되지 않습니다 얼룩진 개인 박테리아 및 가입하지 않았을 수 있습니다 믿을 수 있는 그램 얼룩합니다. 피>4. 접종 루프가 냉각 된 후,현탁액을 슬라이드의 약 절반에 걸쳐 펼쳐 박막을 형성하십시오(그림 3). 피>5. 이 얇은 서스펜션이 완전히 공기 건조되도록하십시오(그림 4). 슬라이드가 열 고정되기 전에 스미어가 완전히 건조되어야합니다!피>6., 열정 박테리아의 슬라이드,선택 건 슬라이드와 coverslip 집게 길게 슬라이드 아래쪽 반대편으로 얼룩 근처의 열 microincinerator10 초 동안(그림 5)입증에 의해 강사입니다. 슬라이드가 충분히 가열되지 않으면 박테리아가 모두 씻겨 나옵니다. 그것이 과열되는 경우에,박테리아 구조상 완전성은 손상될 수 있습니다.
b.허커의 크리스탈 바이올렛으로 1 분 동안 얼룩지게하십시오(그림 6). 물(그림 7)로 부드럽게 씻으십시오. 과량의 물을 떨쳐 버리십시오 그러나 단계 사이에서 건조하게 물지 마십시오. 피>기음., 1 분 동안 그램의 요오드 용액으로 얼룩을 묻히고(그림 8)물기를 부드럽게 씻으십시오.
d. Decolorize 선택하여 슬라이드를 마시며 그램의 decolorizer 행 슬라이드까지라 그냥 중지에서 흐르는 바닥의 슬라이드(그림 9).
- 전체 스미어가 고르게 탈색되었는지 확인하고 언더 탈색 또는 오버 탈색되지 않았는지 확인하십시오.리>물 즉시 세척.
e.1 분 동안 safranin 으로 얼룩을지게하십시오(그림 10)., 과량의 사프라닌을 씻어 낼 때 세균의 사르 파닌 중 일부를 씻어 낼 수 있으므로 부드럽고 짧게 씻는 데 매우주의하십시오.
f.오일 침지 현미경을 사용하여 건조하고 관찰하십시오.
3. 염색 트레이에 사용 된 염료를 싱크대 아래가 아닌 폐 염료 수집 용기에 조심스럽게 부어 넣는지 확인하십시오.
©Hussein Shoeb,저자. 사용 허가,ASM MicrobeLibrary.나는 이것을 할 수 없다., 캡슐 얼룩
토론
많은 박테리아를 분비하는 끈적 끈적 끈적을 덮고라고 캡슐이나 glycocalyx. 이것은 일반적으로 다당류,폴리펩티드 또는 둘 다로 구성됩니다. 캡슐을 생산하는 능력은 유기체의 상속 재산이지만 캡슐은 절대적으로 필수적인 세포 구성 요소는 아닙니다. 캡슐은 종종 특정 성장 조건에서만 생산됩니다. 생명에 필수적인 것은 아니지만 캡슐 p 는 박테리아가 자연에서 생존 할 수 있도록 도와줍니다., 캡슐은 많은 병원성 및 정상 식물상 박테리아가 초기에 숙주의 식균 세포에 의한 식균 작용에 저항하는 것을 돕는다. 토양과 물에서는 캡슐이 원생 동물에 의해 박테리아가 휩싸이는 것을 방지하는 데 도움이됩니다. 캡슐은 또한 많은 박테리아가 표면에 고착되도록 도와 주므로 플러싱에 저항합니다. 또한 많은 박테리아가 생물막을 형성 할 수있게합니다. 생물막은 숙주 세포에 부착되고 공통 캡슐 덩어리에 포함 된 박테리아 집단의 층으로 구성됩니다.,
에 대한 자세한 정보는 세균성 캡슐,다음과 같은 학습 객체에서 강의 가이드:
- 이 Glycocalyx(Capsule)과 S-레이어는다;단위 1,절 IIB4a
- 저항하는 능력을 식세포 말림;단위 3,Section B5b
유기체
탈지유에 국물이 문화의 엔테로박터 aerogenes. 탈지유는 캡슐 생산을위한 필수 영양소를 공급하며 또한 약간 얼룩이지기 쉬운 배경을 제공합니다.
절차(개별적으로 수행해야 함)
1., 당신의 루프와 탈지 우유 국물 문화를 저어 현미경 슬라이드에 엔테로 박터 에어로 겐 2-3 루프를 놓습니다. 피>2. 귀하의 접종 루프를 사용하여 슬라이드의 약 1 인치를 덮기 위해 샘플을 펼칩니다. 피>3. 완전히 공기 건조 시키십시오. 열 수정을하지 마십시오. 캡슐은 유리에 잘 붙고 열은 캡슐을 파괴 할 수 있습니다. 피>4. 1 분 동안 크리스탈 바이올렛으로 얼룩을지게하십시오. 피>5. 20%황산동 용액으로 과량의 염료를 씻어 내십시오. 피>6. 과량의 황산동 용액을 흔들어 즉시 말립니다.피>7. 오일 침지 현미경을 사용하여 관찰하십시오., 유기체와 슬라이드에 건조 된 우유는 캡슐이 무색으로 유지되는 동안 보라색 염료를 집어들 것입니다. 피>8. 염색 트레이에 사용 된 염료를 싱크대 아래가 아닌 폐 염료 수집 용기에 조심스럽게 부어 넣는지 확인하십시오.피>9. 우유에서 정상적인 식물상 인 캡슐화 된 박테리아 인 Streptococcus lactis 의 데모 캡슐 얼룩을 관찰하십시오.
A.Gram Stain
만들의 그림을 각각의 박테리아에서 당신의 그람 염색 준비합니다.,
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| Color = Gram reaction = Shape = |
Color = Gram reaction = Shape = Arrangement = |
B., 캡슐 얼룩
만들기의 캡슐 얼룩 준비의 엔테로박터 aerogenes 과 데모를 캡슐의 얼룩연쇄상구균.
Streptococcus lactis 의 캡슐 얼룩
