Mål
- Bli kjent med speciation av slekten Staphylococcus.
- Vokse og identifisere ulike stafylokokker arter ved hjelp av selektiv og differensiert agar
- Identifisere 3 hemolytisk typer på blodagar.,
Staphylococcus er en slekt av Gram +, nonspore-forming cocci som tilhører familien Micrococcaceae som er ofte funnet som normale menneskelige microbiota av huden og nesehulen. Det er fem organismer for å vurdere potensielle menneskelige patogener i denne slekten: S. aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus, S. haemolyticus, og S. hominis, men de tre første er de vanligste isolater. S. aureus er ofte ansett for å være den mest problematiske av de tre patogener og skiller seg fra de to andre ved å være den eneste i stand til å coagulate plasma. S., aureusis i stand til å forårsake mange overfladiske pyogenic (pus-forming) infeksjoner av dermis og underliggende vev så vel som alvorlige systemiske infeksjoner. Det kan produsere en rekke giftstoffer, inkludert enterotoxins (matforgiftning), cytotoxins (generell systemisk giftstoffer), og toksisk sjokk superantigens. Den andre coagulase-negative stafylokokker (S. epidermidis og S. saprophiticus) er mye mindre ofte funnet som patogener, men er noen ganger forbundet med endokarditt, protese felles infeksjoner og sår, infeksjoner, bare for å nevne noen.,
Denne øvelsen gir deg muligheten til å bruke selektive medier, i dette tilfellet basert på høy natriumklorid (MSA, og SM1 10 er både selektive medier for isolasjon av Stafylokokker – 7.5% NaCl). Et selektivt medium har en hemmende middel som favoriserer veksten av visse bakterier ved å hemme andre. MSA inneholder en ekstra indikator for å overvåke mannitol gjæring, noe som gjør det til en differensial media også., Av bakterier som kan vokse i nærvær av høy NaCl, noen er halophilic (krever en viss konsentrasjon av salt til å vokse), mens andre er haloduric (ikke bruk salt, men tåler det). Staphylococcusis ikke halophilic, men heller haloduric, i at det kan leve i eller tåle høye konsentrasjoner av NaCl. Det høye saltinnholdet i SM1 10 og MSA hemmer andre vanlige hud mikroorganismer. Den andre medier blir brukt i denne øvelsen er for å skille patogene Staphylococcus fra nonpathogenic, og for identifisering av arter.,
Ikke bare salt og motstandsdyktig mot Staphylococcus er alltid facultatively anaerob. Når farget, vil det bli sett i små klynger (staphylo = cluster). Staphylococcus er vanligvis enten beta-hemolytisk eller ikke hemolytisk i det hele tatt (kalt gamma hemolyse). Patogene Stafylokokker kan produsere en rekke virulence faktorer, blant annet giftstoffer,coagulase, leucocidins, og hydrolytic enzymer som kan skade vert vev.
blodagar (BAP) er laget med 5% saueblod. Det er en vanlig mediet som brukes til kultur bakterier fordi:
- Det er en stor berikelse medium for kresne bakterier.,
- Hemolyse av blod celler kan være svært nyttig som en identification test.
CNA-agar er en type blodagar. Den eneste forskjellen er at CNA har et antibiotikum, naladixic syre, som hemmer gram – bakterier.
Hemolyse er nedbryting av røde blodlegemer. Hemolysins er enzymer som produseres av enkelte bakterier og er sluppet inn i mediet rundt bakteriell koloni. Det kan være en fullstendig nedbryting av cellene, med utgivelsen av hemoglobin og en lysning av de røde fra det omkringliggende mediet rundt kolonien., Eller hemolyse kan være en delvis sammenbrudd, noe som resulterer i en grønn eller grønn-gul sone rundt kolonien.,jeg>
SKJEMATISK AV id-PROSEDYRE
1. økt ⇒ 2. økt ⇒ 3. økt ⇒ 4. sesjon
CNA DNAse Coagulase Kjøre andre nødvendige tester for å Identifisere arter
MSA, SM110 ONPG
Catalase Oksidase
Gram Phenol red laktose
Flekken Buljong
PROSEDYRER
Obs!
pass på å holde en liste over alle testresultater for isolater.,
1. Sesjon
- Hvert bord vil bli gitt en Stafylokokk arter som vokser på aNA eller TSA plate.
- ved Hjelp av en isolasjon strek teknikk, inoculate Columbia naladixic syre (CNA) og plasser novobiocin plate i § 1.
- Novobiocin følsomhet er et viktig skille har blant noen av Staphylococcus arter. Sted pinsett til alkohol og deretter sterilisere pinsett ved å kjøre dem gjennom flammen raskt. Alkohol vil fange i brann, og når fordampet fra pinsett, vil de da bli sterile., Du kan nå velge en novobiocin plate fra abonnenten til en plass på CNA-plate—i FØRSTE strek punkt (der det vil være confluent vekst av bakterien).
- For de andre agar plater–SM 110 plate,mannitol salt agar (MSA) plate, DNAse agar plate—et grader linje nedover midten av platen er tilstrekkelig for vekst resultater.
- Inkuber media ved 37°C.
- Kjør oksidase og catalase tester på plate kultur.
- gramfarging av isolere for å komme i form og ordning samt gram reaksjon.
- Vi vil gjøre det ONPG teste neste økt., Denne testen krever slå på av et sett av gener, det lac operon. For å påvirke denne aktiviteten, bakterien har for å bli utsatt for laktose. Dette er hvorfor du vil også inoculate et rør av phenol red laktose buljong.
2. Sesjon
- Gå til enkelte lab øvelser for å tolke mannitol salt og DNAse test (krever kompatibel maskinvare (HCl).
- På CNA-plate, du ser etter 2 reaksjoner— – følsomhet for å novobiocin antibiotikum OG hemolyse av blod.,
- Novobiocin følsomhet – En sone av 17 mm indikerer følsomhet
- Hemolytiske reaksjoner :
- alpha (α) hemolyse–grønn sone rundt kolonien, forårsaket av lekkasje hemoglobin konvertert til biliverdin, kalles en delvis hemolyse
- beta (β) hemolyse–komplett rydding rundt kolonien forårsaket av nedbrytning av RBCs av streptolysin enzymer
- gamma (γ) hemolyse – ingen hemolysins, ingen sone
- Staphylococcus artene er enten beta-hemolytisk eller gamma (ikke hemolytisk)., Staph aureus produserer alfa-toxin som vanligvis fører til brede soner av beta (komplett) hemolyse.
- Kontroller SM 110 for vekst og for pigment. Næringsstoffer og vitaminer i dette mediet forbedre pigmentering av patogene Staphylococcus, de koloniene blir ayellow-oransje koloni.
- Kjør coagulase-test: det er knyttet en øvelse for denne testen. Det er bare noen få arter av Staphylococcus som er positive til coagulase-test (se tabellen nedenfor), og S. aureus er den mest vanlige., Siden det er 2 typer coagulase-enzym—bundet og fri—det er 2 ulike tester som kan brukes for å identifisere disse enzymene. RØRET metoden er den definitive test av 2, den mest pålitelige. Den coagulase-test øvelsen i laboratoriet manuell tydelig beskriver disse 2 versjoner.
- ONPG test vil bli kjørt. Se i lab øvelser for denne testen for å få instruksjoner om hvordan å kjøre test. Siden det er svært lite væske i røret, vil du ønsker å dekke toppen av røret vil parafilm, og legg deretter på røret toppen over det. Dette reduserer uttørking.,
3. Sesjon
- stor test reaksjon til bruk i Staphylococcus identifikasjon er coagulase-test reaksjon, som deler slekten Staphylococcus inn i 2 grupper—coagulase-negative arter og coagulase-positive arter. Testen media på at du vil kjøre for identifisering avhenger av hvilken kategori din organisme faller i. Du kan være lurt å kjøre noen av de følgende testene.,
- Available media:
- arginine and ornithine
- decarboxylase broths
- urea broth
- ONPG
- sucrose, trehalose, maltose sugars
- VP broth
- nitrate broth
- If you have a coagulase positive Staph, there are only a few species available as your choice: there is a table with those species below.,
- Hvis din organismer er coagulase-negative, sjekk flytdiagrammet nedenfor, så vel som Bergey ‘ s Manual eller andre id-bøker.
- Kjør nødvendige tester for identifikasjon. DET ER OPP TIL DEG Å BESTEMME HVA SOM EKSTRA TESTER FOR Å KJØRE FOR EN TYDELIG IDENTIFISERING.
4. Sesjon
- Les noen tester fra siste økt (se lab øvelser for informasjon om test tolkninger.
- Skriv opp en rapport for Staphylococcus identifisere arter, hvis din instruktør leder deg til å gjøre det.,
| Tube coagulase | Acid from trehalose | VP test | ONPG test | |
| S. aureus | + | + | + | – |
| S. intermedius | + | + | – | + |
| S., hyicus | variable | + | – | – |
| S. schleiferi | + | – | + | ? |
Common coagulase negative Staphylococcal species
| S. aureus | S. epidermidis | S. saprophiticus | |
| Alpha toxin (ß-hemolysis) | + (most strains) | – | – |
| Growth on 7.,acace93570″>DNase production | + (usually) | – | – |
| Sensitivity to novobiocin | sensitive | sensitive | resistant |
* Novobiocin sensitivity = >17mm zone size
QUESTIONS
- Which type of hemolysis is often associated with pathogenicity?,
- Hva er kjennetegn av slekten Staphylococcus?
- Kan du gi testen reaksjon av S. aureus for hvert av de store testene kjøre—MSA, SM110, coagulase, catalase, oksidase, og DNAse?
- Hva skjer RBCs i beta og alpha hemolyse?
Bidragsytere og Attribusjoner
-
Jackie Reynolds, Professor i Biologi (Richland College)
