LABORATORIUM DIAGNOSTISERING AV HAEMOGLOBINOPATHIES
Den primære etterforskningen av en haemoglobinopathy bør inneholde et komplett blodprosent, perifert blod film og hemoglobin elektroforese (se Fig. 29.4). Full blodprosent lar vurdering dannelse av hemoglobin, som bedømmes av røde blodlegemer indekser, mener celle volum (MCV) og gjennomsnittlig celle hemoglobin (MCH)., Microcytosis (MCV < 76 fL) og hypochromia (MCH < 27 pg), i møte med en normal eller hevet røde blodceller (> 5.5 × 1012/L) i en jern-fylt pasienten, foreslå en diagnose av thalassaemia. I tilfelle av β thalassaemia store eller intermedia, dette er forbundet med en betydelig grad av blodmangel, mens i thalassaemia egenskap hemoglobin er vanligvis normal eller bare marginalt redusert. Undersøkelse av blod film farget av en Giemsa-metoden kan være nyttig i å bekrefte diagnosen., Men, endelig diagnose ofte hviler på elektroforetiske eller kromatografiske analyser av hemoglobin i røde blodlegemer haemolysates. Cellulose acetate elektroforese ved alkalisk pH (8.9–9.1) er den mest brukte metoden, blir enkel, rask, rimelig og effektiv i å skille den vanlige hemoglobin varianter. I homozygote sigd celle anemi, HbS dominerer. En variabel mengde HbF er til stede, høyere proporsjoner (> 10%) blir vanligvis assosiert med en mildere kliniske kurset. Hemoglobin A2-konsentrasjonen er vanligvis normal.,
Løselighet testing basert på redusert løselighet av deoxy-HbS i nærvær av reduksjonsmidler, for eksempel natrium dithionite, har en begrenset rolle i diagnostisering av sigdcelleanemi, da den ikke skiller homozygote sykdom og operatør stater. I en nødssituasjon, en positiv løselighet test tatt i forbindelse med en betydelig redusert hemoglobin og typiske røde blodlegemer morfologi poeng sterkt mot en diagnose av sigdcelleanemi. Dette bør være bekreftet av hemoglobin analyse ved første anledning., Flere andre varianter, inkludert HbD, HbG og Hb Lepore, har en elektroforetiske mobilitet identisk med HbS på cellulose acetat, men kan være preget av negative sigd løselighet test og citrate agar gel elektroforese ved sur pH (6.0). På samme måte, haemoglobins C, E og O, som co-migrere på cellulose acetat ved alkalisk pH, kan være differensiert etter citrate agar-elektroforese. Både HbE og Hb Lepore er forbundet med thalassaemic røde blodlegemer indekser, noe som ytterligere styrker sin utmerkelse fra electrophoretically lignende varianter., Isoelectric fokus forbedrer oppløsningen på noen strukturelle varianter og kan også brukes for neonatal screening av eluates fra Guthrie (tørket blod spot) – kort, siden det reduserer forstyrrelser fra methaemoglobin til stede i slike prøver.
Høy ytelse væske-kromatografi (HPLC) er en rask og følsom metode for separasjon og kvantifisering av haemoglobins, som i noen tilfeller kan identifikasjon av varianter som ikke er mulig med andre teknikker., Siden det er i stor grad automatisert og krever liten mengder av prøven, HPLC har blitt metodevalget for stor-skala befolkningen testing for eksempel neonatal screening-programmer. Universal neonatal screening for sigdcelleanemi har vært brukt i USA og England for noen tid, og lignende programmer blir introdusert i andre europa, midtøsten og Afrikanske land, avhengig av utbredelsen av forholdene og ressursene som er tilgjengelige., Slike programmer har resultert i betydelige fordeler i form av redusert dødelighet og sykelighet på grunn av forbedret vare, tidlig implementering av profylakse mot pneumokokk-infeksjon og foreldres utdanning. I β thalassaemia, andelen av individuelle haemoglobins varierer med underliggende genotype. Homozygote β0 thalassaemia er forbundet med en overvekt av HbF, fravær av HbA og variable mengder HbA2 (område 1.0–6.0%, mener 1.7%). I personer med homozygote β+ thalassaemia eller compound heterozygote β0/β+ thalassaemia, en variabel mengde HbA-er til stede., Hemoglobin F er økt, og distribuert heterogeneously blant røde celler.
Nøyaktig kvantifisering av HbA2 av HPLC eller microcolumn kromatografi er viktig for diagnose av β thalassaemia egenskap, som HbA2 er forhøyet, vanligvis > 3.5%., Bærere av «normal A2′ eller ‘tause’ β thalassaemia på grunn av milde β-genet mangler eller co-arv på en δ gene mutation i cis-eller trans ikke lett kan skilles fra α thalassaemia ved konvensjonell screening metoder og krever etterforskning av spesialiserte teknikker, inkludert in vitro-globin-kjeden syntese og DNA-analyse. Analyse av globin-kjeden syntetiske prosenter av tritiated leucine inkorporering og carboxymethylcellulose kromatografi er den beste måten å identifisere individer med thalassaemia, selv om det er lite brukt på grunn av sin arbeidskrevende natur.,
α thalassaemias er preget electrophoretically av tilstedeværelsen av den raske varianter, Hb Bart (γ4) og HbH (β4), som er mest åpenbar i neonatal prøver. I hydrops fetalis på grunn av homozygote α0 thalassaemia, Hb Bart dominerer og er funnet i små mengder i andre α thalassaemia syndromer i den neonatale periode. Hemoglobin H kan også oppdages ved farging for HbH inkludering organer., Diagnosen klinisk stille former for α thalassaemia er ofte en av ekskludering, blir gjort på grunnlag av fagets etnisk opprinnelse, microcytic hypochromic røde blodlegemer indekser og en normal eller lav HbA2 konsentrasjon i nærvær av normal strykejern status. Endelig diagnose kan være laget av DNA-analyse, som også ofte skille α0 og α+ thalassaemia.,
Mens flertallet av haemoglobinopathies kan bli diagnostisert av hemoglobin elektroforese, varianter forårsaket av aminosyre-erstatninger som ikke endre kostnad, slik som de som finnes i noe ustabile haemoglobins eller haemoglobins med endret oksygen affinitet, kan unngå å bli oppdaget. Videre undersøkelser som kan være nyttig i denne sammenheng inkluderer vurdering av hemoglobin ustabilitet og oksygen affinitet., Høy gjennomstrømning DNA-analyse har gjort dette mulig måte av screening for globin mutasjoner i rikere land, med teknikker som multiplex ligation-dependent probe amplification slik at identifisering av store genmutasjoner som var tidligere bare oppdages ved hjelp av Southern blotting. Hemoglobin mass spectrometry kan også brukes til å identifisere unormale globins ved å måle deres masse nøyaktig, med særlig potensial for bruk i screening-programmer som allerede er i bruk mass spectrometry.,
identifisering av par i fare for store haemoglobinopathies av antenatal eller preconceptional screening tillater informert reproduktive valg med mulighet for prenatal diagnose. I de fleste tilfeller, kan dette nå gjøres i første trimester av påvisning av mutant globin-gener i chorionic villous DNA. I flere land, spesielt på Kypros hvor transportøren pris for β thalassaemia når 12%, dette har ført til en markert nedgang i fødselen forekomsten av hemoglobin lidelser., Preimplantation genetisk diagnose er i økende grad brukt for å tillate valg av upåvirket embryo, selv om det fortsetter å være en krevende og kostbar prosess som ikke gjelder for de fleste par. Forsøk fortsette å utvikle ikke-invasiv prenatal diagnose ved hjelp av fosterets celler og DNA i mors blod, selv om dette er i dag ikke teknisk mulig som en rutinemessig prosedyre for haemoglobinopathies.
