laboratoriediagnos av hemoglobinopatier
den primära undersökningen av en hemoglobinopati bör innehålla en fullständig blodstatus, perifer blodfilm och hemoglobin elektrofores (se Fig. 29.4). Det fullständiga blodvärdet gör det möjligt att bedöma hemoglobinbildning, som bedöms av erytrocytindexen, medelcellvolymen (MCV) och medelcellens hemoglobin (MCH)., Mikrocytos (MCV < 76 fL) och hypochromia (MCH < 27 pg), i ansiktet av en normal eller upphöjda röda blodkroppar (> 5,5 × 1012/L) i en järn-fylld patient, föreslå en diagnos av thalassemi. I fallet med β-thalassemi major eller intermedia är detta förknippat med en signifikant grad av anemi, medan hemoglobinet i thalassemidrag vanligtvis är normalt eller endast marginellt reducerat. Undersökning av en blodfilm färgad av en Giemsa-metod kan vara till hjälp för att bekräfta diagnosen., Definitiv diagnos vilar emellertid ofta på elektroforetisk eller kromatografisk analys av hemoglobin i hemolysat av röda blodkroppar. Cellulosaacetatelektrofores vid alkaliskt pH (8.9–9.1) är den mest använda metoden, som är enkel, snabb, billig och effektiv för att separera de vanliga hemoglobinvarianterna. I homozygot sicklecellanemi dominerar HbS. En variabel mängd HbF är närvarande, högre proportioner (> 10%) är i allmänhet associerade med en mildare klinisk kurs. Hemoglobin A2 koncentration är vanligtvis normal.,
Löslighetstestning baserad på minskad löslighet hos deoxi-HbS i närvaro av reduktionsmedel, till exempel natriumditionit, har en begränsad roll vid diagnos av sicklecellsjukdom eftersom den inte skiljer homozygot sjukdom och bärartillstånd. I en nödsituation pekar ett positivt löslighetstest som tagits i samband med en signifikant minskad hemoglobin och typisk erytrocytmorfologi starkt mot en diagnos av sicklecellsjukdom. Detta bör bekräftas genom hemoglobinanalys så snart som möjligt., Flera andra varianter, inklusive HbD, HbG och Hb Lepore, har en elektroforetisk rörlighet som är identisk med HbS på cellulosaacetat men kan särskiljas genom det negativa sickle-löslighetstestet och citratagargelelektrofores vid syra pH (6.0). På samma sätt kan hemoglobiner C, E och O, som sammigrerar på cellulosaacetat vid alkaliskt pH, differentieras genom citratagar elektrofores. Både HBE och Hb Lepore är associerade med thalassemiska röda cellindex, vilket ytterligare hjälper deras skillnad från elektroforetiskt liknande varianter., Isoelektrisk fokusering förbättrar upplösningen av vissa strukturella varianter och kan också användas för neonatal screening av eluater från Guthrie (torkad blodpunkt) kort, eftersom det minskar störningar från methemoglobin närvarande i sådana prover.
högpresterande vätskekromatografi (HPLC) är en snabb och känslig metod för separation och kvantifiering av hemoglobiner som i vissa fall gör det möjligt att identifiera varianter som inte är möjliga med andra tekniker., Eftersom det i stor utsträckning är automatiserat och kräver små mängder prov har HPLC blivit den metod som valts för storskalig populationstestning, såsom neonatala screeningprogram. Universal neonatal screening för sicklecellsjukdom har använts i USA och England under en tid, och liknande program införs i andra europeiska, mellanöstern och afrikanska länder, beroende på förekomsten av villkor och tillgängliga resurser., Sådana program har resulterat i betydande fördelar när det gäller minskad dödlighet och sjuklighet på grund av förbättrad vård, tidigt genomförande av profylax mot pneumokockinfektion och föräldrautbildning. Vid β-talassemi varierar andelen enskilda hemoglobiner med den underliggande genotypen. Homozygot β0 talassemi är förenat med en dominans av HbF, frånvaro av HbA och varierande mängder av HbA2 (intervall 1, 0–6, 0%, medel 1, 7%). Hos individer med homozygot β+ talassemi eller förening heterozygot β0/β+ talassemi är en variabel mängd HbA närvarande., Hemoglobin F ökar och distribueras heterogent bland röda blodkroppar.
noggrann kvantifiering av hba2 genom HPLC eller mikrokolumnkromatografi är nödvändig för diagnos av β-thalassemi drag, där hba2 är förhöjd, typiskt > 3.5%., Bärare av ”normal A2” eller ”tyst” β-talassemi på grund av milda β-gendefekter eller samarvs av en δ-genmutation i cis eller trans kan inte lätt särskiljas från α-talassemi med konventionella screeningmetoder och kräver undersökning med specialiserade tekniker, inklusive in vitro globinkedjesyntes och DNA-analys. Analys av globinkedjans syntetiska förhållanden genom tritierad leucininkorporering och karboximetylcelluloskromatografi är det definitiva sättet att identifiera individer med talassemi, även om det sällan används på grund av sin mödosamma natur.,
α thalassaemierna kännetecknas elektroforetiskt av närvaron av de snabbrörliga varianterna, HB Barts (γ4) och HbH (β4), som är mest uppenbara i neonatala prover. I hydrops fetalis på grund av homozygot α0 thalassemi dominerar HB Barts och finns i mindre mängder i andra α thalassemisyndrom under nyföddhetsperioden. Hemoglobin H kan också detekteras genom färgning för HbH inklusion organ., Diagnosen av kliniskt tysta former av α thalassemi är ofta en av uteslutning, som görs på grundval av ämnets etniska ursprung, mikrocytiska hypokromiska röda cellindex och en normal eller låg hba2-koncentration i närvaro av normal järnstatus. Definitiv diagnos kan göras genom DNA-analys, som också ofta kan skilja α0 och α+ thalassemi.,
medan majoriteten av hemoglobinopatier kan diagnostiseras genom HB-elektrofores, kan varianter orsakade av aminosyrasubstitutioner som inte förändrar laddningen, såsom de som finns i vissa instabila hemoglobiner eller hemoglobiner med förändrad syreaffinitet, undgå detektion. Ytterligare undersökningar som kan vara till hjälp i detta sammanhang inkluderar bedömning av hemoglobin instabilitet och syreaffinitet., Hög genomströmning DNA-analys har gjort detta till ett genomförbart sätt att screening för globinmutationer i rikare länder, med tekniker som multiplexligationsberoende sondförstärkning som möjliggör identifiering av stora genmutationer som tidigare endast detekterades med hjälp av Southern blotting. Hemoglobinmasspektrometri kan också användas för att identifiera onormala globiner genom att mäta deras massa noggrant, med särskild potentiell användning i screeningprogram som redan använder masspektrometri.,
identifiering av par i riskzonen för större hemoglobinopatier genom prenatal eller prekonceptionell screening tillstånd informerade reproduktiva val med möjlighet till prenatal diagnos. I de flesta fall kan detta nu åstadkommas under första trimestern genom detektering av mutanta globingener i korionvilligt DNA. I flera länder, särskilt Cypern där bärarfrekvensen för β-talassemi når 12%, har detta lett till en markant minskning av födelseincidensen av hemoglobinstörningar., Preimplantatorisk genetisk diagnos används alltmer för att tillåta urval av opåverkade embryon, även om det fortsätter att vara en krävande och dyr process som inte är tillämplig på de flesta par. Försök fortsätter att utveckla icke-invasiv prenatal diagnos med hjälp av fosterceller och DNA i moderns blod, även om detta för närvarande inte är tekniskt genomförbart som ett rutinförfarande för hemoglobinopatier.
